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哈靈生物實驗室教大家如何鑒定血清的質量
2015-5-20 閱讀(804)
哈靈生物實驗室教大家如何鑒定血清的質量
*，血清為細胞提供基本的營養物質、提供激素和各種生長因子、提供結合蛋白、提供促接觸和伸展因子使細胞貼壁免受機械損傷、對培養中的細胞起到一定的保護作用。
市場上的血清種類繁多，魚龍混雜，很多科研工作者，特別是剛接觸細胞培養的人，難以分辨血清質量的優劣。下面，我們就來探究一下如何鑒定血清的質量：
1. 理化性質：如滲透壓、pH值、蛋白電泳圖譜、蛋白含量、激素水平、內毒素等。蛋白含量包括血清總蛋白含量（不低于35-45g/L）、球蛋白含量（應小于20g/L)、血紅蛋白含量等。其中球蛋白含量是一 項非常重要的指標，血清中球蛋白主要是抗體，球蛋白含量越低血清質量越高。血紅蛋白也是越低越好。
2. 微生物檢測：包括細菌、真菌、支原體、病毒等。特別是對支原體、病毒的檢測，支原體是一種很小的微生物，可通過孔徑22u的濾膜。支原體、病毒污染在光 學顯微鏡下難于察覺，細胞也能生長繁殖，但會影響實驗結果。檢測支原體的方法很多，如培養法、PCR法、熒光染色法、電鏡觀察法等。
3. 促生長效果：這是血清重要的特性之一，應當以培養的細胞來檢測。有兩種方法：克隆形成率、貼瓶 率測定法和連續傳代培養法。
(1) 克隆形成率測定:一般以懸浮生長的細胞為培養對象，按有限稀釋法做克隆化培養，將不同批號的血清配制成不同濃度的培養基，細胞也稀釋成不同濃度，接種到96孔板，每孔200ul，培養一定時間，統計有克 隆生長的孔，計算出百分比，再與對照的標準血清相比較，就可看出不同批號血清間的區別。比較低的濃度，更能觀察出血清質量間的細微差別。
(2) 貼瓶率測定:是以貼壁細胞為培養對象，將細胞稀釋至低密度，接種至平皿，每皿200或100個細胞，以不同濃度的血清培養基培養，培養一定時間后棄培養基，染色后統計集落數，計算出集落數占接種細胞數的百分比，同樣再與標準血清比較，判斷血清質量高低。 (3) 連續傳代培養法:是將細胞培養于 3個一定體積的培養瓶中，待測血清配制為5％濃度，一般于第七天收集細胞，計數，取平均值，中間可以更換一次培養基。連續測試三個周期以上， 觀察細胞生長狀況，并將每次的計數結果與標準血清的測試結果比較。
4. 對于使用者，判斷血清質量先從外觀入手。好的血清應該是透明清亮，土黃色或棕黃色，無沉淀或極少沉淀，比較粘稠。如發現血清渾濁、不透明、含許多沉淀物，說明血清污染或血清中的蛋白質變性；若血清呈棕紅色，說明血清中的血紅蛋白含量太高，取材時有溶血現象；如果搖晃時感覺液體稀薄，說明血清中摻入的生理鹽水太多。如果要進一步了解血清的質量，則應連續培養某些細胞，觀察細胞生長狀況。
