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公司信息
全組織琥珀酸脫氫酶活性染色試劑盒說明書
2022-11-15 閱讀(158)
全組織琥珀酸脫氫酶（SDH）活性染色試劑是一種旨在使用合成電子受體四氮唑蘭染料，通過反應系統的作用，組織樣本中酶活性部位呈現出藍黑色沉淀現象而經典的技術方法。該技術經過精心研制、成功實驗證明的。其適合于各種動物組織樣品琥珀酸脫氫酶的活性檢測。用于衰老、能量代謝、蛋白組學、病理生理學。產品不含污染性蛋白酶，嚴格無菌，即到即用，操作簡捷，性能穩定，反應優化，顯色清晰。
琥珀酸脫氫酶（succinnate dehydrogenase；SDH；EC 1.3.99.1）是三羧酸循環（tricarboxylic acid cycle；TCA）或Krebs循環中與細胞線粒體膜相關的重要元素，位于線粒體內膜，參與細胞呼吸鏈。琥珀酸脫氫酶由27kd和70kd兩個單體組成。其功能在于催化琥珀酸（succinate）的氧化反應，產生延胡索酸（furmarate），通過黃素腺嘌呤二核苷酸（Flavin Adenine Dinucleotide；FAD）傳遞電子。基于琥珀酸脫氫酶的反應原理，使用人工電子受體染料硝基藍四氮唑（Nitro Blue Tetrazolium；NBT），接受來自還原型黃素腺嘌呤二核苷酸（Reduced flavin Adenine Dinucleotide；FADH2）的電子，而被還原，產生不溶性藍色或藍黑色甲暨色素。據此證明組織細胞琥珀酸脫氫酶的活性。
保存染色液（Reagent B）和反應液（Reagent C）在－20℃冰箱里，避免光照；其余的保存在4℃冰箱里，有效保證6月
染色開始前，將－20℃冰箱里的試劑置于室溫下融化；移取2.7毫升染色液（Reagent B）到新的15毫升錐形離心管，加入300微升反應液（Reagent C），混勻后，標記為染色工作液，置于冰槽里，避免光照。然后進行下列操作。
1． 準備1個6孔細胞培養板
2． 放進新鮮切除的動物組織樣本（注意：建議組織大小為0.5厘米厚，1厘米長；如果過大，最好刀切處理一下）
3． 將組織壓平
4． 小心加入3毫升清理液（Reagent A），浸沒整個組織
5． 小心抽去清理液（Reagent A）
6． 小心加入3毫升染色工作液，浸沒整個組織
7． 放進37℃培養箱里孵育10分鐘，避免光照
8． 小心抽去染色工作液
9． 小心加入3毫升清理液（Reagent A），浸沒整個組織
10． 小心移去切片上的清理液（Reagent A）
11． 重復實驗步驟9至10二次
12． 小心加入3毫升固著液（Reagent D），浸沒整個組織
13． 室溫下孵育15分鐘
14． 小心抽去固著液（Reagent D）
15． 小心加入3毫升清理液（Reagent A），浸沒整個組織
16． 小心抽去清理液（Reagent A）
17． 重復實驗步驟15至16二次
18． 后續石蠟切片（6微米厚）或冰凍切片（10微米厚）
19． 在光學顯微鏡下觀察：表達琥珀酸脫氫酶的組織細胞為陽性組織細胞，呈現藍黑色。
注意事項
1． 本產品為10次操作
2． 操作時，須戴手套
3． 用戶根據實際需求，按比例配制試劑用量
4． 反應液（Reagent C）避免反復凍融
5． 陰性對照時，染色工作液不含有反應液（Reagent C）
6． 可以使用50毫摩爾丙二酸鈉（Sodium malonate）作為抑制劑
7． 整個操作，在避光狀態下進行
8． 染色孵育時間，根據樣品和酶活性強弱調整，通常為5至30分鐘
9． 全組織染色存在其染色不均勻、組織內部染色滲透困難等局限
10． 樣品染色后保存，避免光照
11． 本公司提供系列組織細胞酶活性染色試劑產品
質量標準
1． 本產品經鑒定性能穩定
2． 本產品經鑒定顯色清晰
