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無需純化DNA的植物組織直接PCR

閱讀:451發布時間:2013-4-27

DNA提取是許多分子生物學實驗的*步,譬如PCR、克隆和測序。核酸純化的原始目的是為了去除可能干擾后繼反應的雜質,對于PCR技術來說,若是能跳過這一步,直接利用樣本進行PCR,那不僅能省錢省力,還能避免交叉污染的風險。由于現在的DNA聚合酶性能已經越來越強大,實驗室之間早已流傳著各種直接用樣品進行PCR的小技巧,不過大多只限于哺乳動物細胞或者細菌類,而甚少涉及植物細胞。
愿望是美好的,現實是殘酷的。植物組織富含多糖、多酚和蛋白等物質,很有可能抑制PCR反應,怎么辦?賽默飛世爾派出了Phire熱啟動 II DNA聚合酶,來對付這些潛在的拖后腿的PCR抑制劑。
Phire熱啟動 II DNA聚合酶是一種特殊的工程酶,融合有DNA 雙鏈結合蛋白,不但聚合能力強,而且對多種植物組織中的PCR 抑制劑表現出*的抵抗力。有了這員猛將,Phire 植物組織直接PCR試劑盒即可直接從植物樣本中擴增DNA,而無需預*行費時而昂貴的DNA純化。
此酶是一種特殊的工程酶,融合有DNA 雙鏈結合蛋白,不但聚合能力強,而且對多種植物組織中的PCR 抑制劑表現出*的抵抗力。有了這員猛將,Phire 植物組織直接PCR試劑盒即可直接從植物樣本中擴增DNA,而無需預*行費時而昂貴的DNA純化。
無論是新鮮植物還是4ºC貯存或者凍存的植物都可作為模板材料。此外,貯存在諸如Whatman 903® 和FTA® 卡片上的植物材料也可作為模板材料。賽默飛世爾的研究人員還曾用儲存于-20ºC 達十年之久的橡樹葉片成功進行了直接PCR。
除了DNA聚合酶,Phire植物組織直接PCR試劑盒還包含一整套的優化試劑,制樣工具以及對照引物,可以方便地取樣和擴增。使用Harris Uni-Core取樣器和切片墊取樣,可以輕松獲得大小均一的樣本。取樣后,按壓活塞將已取到的樣本小塊直接放入PCR反應液中,開展PCR擴增。


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