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基因組純化之Thermo篇 基于磁珠的基因組提取純化系統

閱讀:368發布時間:2013-4-7

賽默飛世爾科技推出的Thermo Scientific KingFisher 磁珠純化技術是新一代樣品純化技術,在 KingFisher系統上利用轉移磁珠的純化方法,從普通樣品如:血液、動植物組織、細菌、細胞、病毒;以及疑難樣品如:唾液、土壤、糞便、FFPE、法檢等樣品中,自動化快速提取高產量、高質量、高完整度的DNA、RNA樣品。KingFisher 磁珠純化技術及KingFisher自動磁珠純化儀,除了在核酸純化領域有的表現外,作為開放的平臺,根據試劑盒種類不同,KingFisher 也出色應用于蛋白質純化、免疫細胞分選、細菌富集等領域。
隨著分子生物技術的發展,科研及臨床檢測要求的提高,核酸純化方法也經歷了密度梯度離心,酚氯仿、*、異戊醇抽提,二氧化硅吸附等化學物理方法。目前,基于硅膠膜對核酸特異結合的原理所開發的方法已成為核酸純化的主流方法。為了減少化學、物理因素對核酸的破壞和降解,科學家們力求開發快速、溫和的純化方法,在確保遺傳信息的完整性同時,提高工作效率。而KingFisher磁珠純化法不僅滿足了科研工作者對核酸質量的高要求,同時其自動化、通量高、速度快、靈敏度高的特性也提高了科研工作者的工作效率。目前轉移磁珠的磁珠純化方案正在逐步替代以往的各種方法,特別是目前普遍應用的離心柱法。
酚法抽提、玻璃珠沉淀法、離心柱法與磁珠法:
經典的核酸純化法采用酚、氯仿抽提,樣品經過處理后分為水相和有機相,通過酒精離心沉淀水相中核酸的方法純化樣品中的核酸,這就是我們所說的酚-率氯仿抽提法。酚法抽提相對穩定,至今仍被多數科技工作者廣泛應用,也是其他多種提取方法的操作基礎。
隨后,科學家發現核酸與硅存在特異結合,并開發了用玻璃珠吸附核酸,離心沉淀后經過洗和洗脫得到純化的核酸樣品,因玻璃珠比重較大,容易離心到管底,從而縮短了離心時間,目前此方法仍被部分實驗室采用。
后來科學家將玻璃珠改成玻璃纖維,并將玻璃纖維制成薄膜狀,置于離心管中層,用離心的方法從裂解液中吸附,這就是目前核酸純化的主流方法--離心柱法。離心柱法極大簡化了操作流程、縮短操作時間,目前已成為大多數實驗室主流純化方法;但離心柱法樣品與硅介質結合時間短,樣品回收率低,并對樣品有一定的損傷。 以上提到的三種方法都是需要離心操作的純化方法(圖1),每一批樣品的提取都涉及到開關離心管蓋、廢液處理、加液的操作,不僅引入了人為誤差,也容易在大批量樣品處理時造成交叉污染。而應用磁珠純化技術,則可以利用磁鐵特異吸附磁珠(圖2A),從而省去離心操作,減少人為操作環節,避免人為誤差,不僅節省時間,同時使高通量純化成為可能。


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