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上海科鑒生物科技有限公司
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閱讀:280發布時間:2013-3-18
上皮細胞包括腺上皮,是很多器官如肝、胰、乳腺等的功能成分。又由于癌起源于上皮組織,故上皮細胞培養特別受到重視。但上皮細胞培養中常混雜有成纖維細胞,培養時生長速度往往超過上皮細胞,并難以純化,同時上皮細胞難以在體外長期生存,而且體外培養周期較長。因此細胞純化、延長體外培養壽命和縮短體外培養周期是上皮細胞培養的關鍵。
以皮膚角質形成細胞(keratinocyte,又名角朊細胞)為例,角朊細胞是構成皮膚表皮的主要細胞,其正常的增殖、分化維系著表皮正常的結構和生理功能。角阮細胞的體外培養技術是建立角骯細胞庫*的步驟,也是復合人工皮膚組織工程學研究的先決條件。
成纖維細胞的旺盛生長能抑制角朊細胞的增殖,因此盡可能地從分離物中減少成纖維細胞的污染并控制它們在培養時過度生長是培養成功的關鍵之一。
目前較常用的角朊細胞的體外培養方法可歸納為3種:
一、 組織塊法
zui早的角朊細胞培養方法是組織塊法,將手術切取的無菌皮膚修剪為1-3mm3大小組織塊,間距3-5mm排布在培養瓶底壁上,加入少量培養液,待組織塊貼附后(約2-3小時),加入培養液進行培養。角朊細胞由組織塊中游出,圍繞組織塊周圍生長,呈同心圓狀。這種方法的確可以使角朊細胞在體外培養下存活增殖,但缺點是無法避免成纖維細胞的污染。
二、 細胞滋養層和血清培養法
以Rheinwald和Green在1975年創立的利用經6GryY射線照射失去增殖能力的鼠3T3細胞作為滋養層細胞培養角朊細胞的方法為代表,其特征是3T3細胞滋養層和使用含FCS的培養液。這種培養方法,一般可使角朊細胞分裂50次左右,缺點是細胞培養體系需血清、涂層板和細胞滋養層(feeder cells),成本較高,操作繁瑣。
三、 20世紀80-90年代,無滋養層無血清培養法
傳統的方法需要在培養液中加入一定量的血清。含血清的培養液的生物學效應早已被證實,其含有多種生長因子和活性物質有利于細胞生長,但血清成分復雜,無法準確深入地研究某種單一物質對細胞的作用及機制,因此也有學者不斷探索添加各種已知成分的細胞生長所需輔劑而不含血清的細胞體外培養條件。目前較為常見的一種無血清培養體系為MCDB153(內含多種微量元素)作為基礎培養基,添加EGF、INS、Hydroeortisone、BpE、Transfferin、氨基乙醇、磷酸氨基乙醇、氯化鈣等輔劑,這個體系可以保持角阮細胞的快速增殖,并抑制成纖維細胞的生長,使角骯細胞在無血清條件下的體外培養獲得成功。
2002年,CELLnTEC公司著眼于上皮細胞研究視角,專業研發上皮細胞培養基及相關產品、人原代細胞和Long-term動物細胞。推出一代(newest generation)適用于體外上皮細胞培養的2D、3D培養基。*的祖細胞(Progenitor Cell)配方,模仿祖細胞體內微環境,特定維持祖細胞處于增殖狀態,延緩祖細胞分化。系祖細胞(Progenitor Cell Targeted)培養基,即PCT培養基。
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