Fluo-3 AM是zui常用的檢測細胞內鈣離子濃度的熒光探針之一。分子式為C51H50Cl2N2O23,分子量為1129.85。
Fluo-3和Fura-2相比,其優點是:一方面可以被氬離子激光(argon-ion laser)的488nm激發光激
發,便于檢測;另一方面,Fluo-3和鈣離子結合后熒光變化更強,即對鈣離子濃度變化的檢測更加靈敏;同時,Fluo-3和鈣離子的結合能力較弱,這樣可以比Fura-2檢測到細胞內更高濃度的鈣離子水平;此外,對于細胞內的鈣離子的即時變化反應得更加準確,減小了因為和鈣離子解離速度慢而導致的熒光變化滯后。
本Fluo-3 AM (鈣離子熒光探針) 是配制于無水DMSO (anhydrous DMSO)中的儲存液,濃度為5mM。
Fluo-3 AM是一種可以穿透細胞膜的熒光染料。Fluo-3 AM的熒光非常弱,其熒光不會隨鈣離子濃度
升高而增強。Fluo-3 AM進入細胞后可以被細胞內的酯酶剪切形成Fluo-3,從而被滯留在細胞內。Fluo-3可以和鈣離子結合,結合鈣離子后可以產生較強的熒光,zui大激發波長為506nm,zui大發射波長為526nm。實際檢測時*使用的激發波長為488nm左右,發射波長為525-530nm。Fluo-3的激發光譜和發射光譜參考下圖。
用于細胞內鈣離子檢測時,Fluo-3 AM的常用濃度為0.5-5μM。通常用含有0.5-5μM的Fluo-3 AM適
當溶液和細胞一起在20-37℃孵育15-60分鐘進行熒光探針裝載,隨后適當洗滌,洗滌后可以考慮適當再孵育20-30分鐘以確保Fluo-3 AM在細胞內*轉變成Fluo-3。
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