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大鼠血漿α顆粒膜蛋白(GMP-140)ELISA試劑盒

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更新時間:2016-08-03 21:21:04瀏覽次數:325次

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大鼠血漿α顆粒膜蛋白(GMP-140)ELISA試劑盒
卡邁舒(上海)生物科技有限公司代理國內外高品質ELISA試劑盒,種屬齊全,指標成千上萬種。質量好發貨及時,靈敏度高,特異性強,重復性好,公司成立專業實驗室可寄樣免費代檢測并提供售前售中售后服務,詢價或在線咨詢索取產品說明書。
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大鼠血漿α顆粒膜蛋白(GMP-140)ELISA試劑盒 使用目的:

     為定量(性)測定活化的目標濃度的血清,血漿,組織勻漿,細胞培養上清及其他生物液體,僅用于科研,不得用于醫學診斷。

實驗原理

試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯免疫吸附試驗(ELISA)。往預先包被目標物抗體的包被微孔中,依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體,經過溫育并*洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的目標物呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值),計算樣品濃度。

大鼠血漿α顆粒膜蛋白(GMP-140)ELISA試劑盒組成

名稱 96孔配置 48孔配置 備注 

微孔酶標板 12×8 12×4  

標準品 0.5mL*6 0.5mL*6 按說明書復溶 

* 10mL 10mL  

檢測抗體-HRP 10mL 5mL  

20×洗滌緩沖液 25mL 15mL 按說明書稀釋 

底物A 6mL 3mL  

底物B 6mL 3mL  

終止液 6mL 3mL  

封板膜 2 2  

說明書 1 1  

自封袋 1 1  

大鼠血漿α顆粒膜蛋白(GMP-140)ELISA試劑盒樣本處理及要求

1. 血清:全血標本請于室溫放置2小時或4℃過夜后于2000g離心20分鐘,取上清即可檢測,或將標本放于-20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融。

2. 血漿:可用EDTA或肝素作為抗凝劑,標本采集后30分鐘內于2 - 8 2000g離心30分鐘,或將標本放于-20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融

3. 細胞培養物上清或其它生物標本:2000g離心20分鐘,取上清即可檢測,或將標本放于-20℃或-80℃保存,但應避免反復凍融。

注:標本溶血會影響zui后檢測結果,因此溶血標本不宜進行此項檢測。

需要而未提供的試劑和器材

1. 酶標儀(450nm

2. 高精度加樣器及槍頭:0.5-10uL2-20uL20-200uL200-1000uL

3. 37℃恒溫箱

4. 蒸餾水或去離子水

大鼠血漿α顆粒膜蛋白(GMP-140)ELISA試劑盒注意事項

1. 嚴格按照規定的時間和溫度進行溫育以保證準確結果。所有試劑都必須在使用前達到室溫20-25℃。使用后立即冷藏保存試劑。

2. 洗板不正確可以導致不準確的結果。在加入底物前確保盡量吸干孔內液體。溫育過程中不要讓微孔干燥掉。

3. 消除板底殘留的液體和手指印,否則影響OD值。

4. 底物顯色液應呈無色或很淺的顏色,已經變藍的底物液不能使用。

5. 避免試劑和標本的交叉污染以免造成錯誤結果。

6. 在儲存和溫育時避免強光直接照射。

7. 平衡至室溫后再打開密封袋以防水滴凝聚在冷板條上。

8. 任何反應試劑不能接觸漂白溶劑或漂白溶劑所散發的強烈氣體。任何漂白成分都會破壞試劑盒中反應試劑的生物活性。

9. 不能使用過期產品。

10. 如果可能傳播疾病,所有的樣品都應管理好,按照規定的程序處理樣品和檢測裝置。

試劑準備

試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡后方可使用。

1. 標準品復溶:試劑盒提供6管標準品,每管已標定濃度,并且凍干。實驗前在每個標準品管中加入0.5mL*,蓋好后靜置10分鐘以上,然后反復顛倒/搓動助其溶解,使其恢復為每個標準品管身標注的濃度。

2. 20×洗滌緩沖液的稀釋:蒸餾水按120稀釋,即120×洗滌緩沖液加19份蒸餾水。

大鼠血漿α顆粒膜蛋白(GMP-140)ELISA試劑盒操作步驟

1. 從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4℃。

2. 設置標準品孔和樣本孔,標準品孔各加不同濃度的標準品50μL

3. 樣本孔中加入待測樣本50μL;空白孔不加。

4. 除空白孔外,標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標記的檢測抗體100μL,用封板膜封住反應孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min

5. 棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液(350μL),靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復洗板4-5次(也可用洗板機洗板)。

6. 每孔加入底物AB50μL37℃避光孵育15min

7. 每孔加入終止液50μL15min內,在450nm波長處測定各孔的OD值。

實驗結果計算

以所測標準品的OD值為橫坐標,標準品的濃度值為縱坐標,在坐標紙上或用相關軟件繪制標準曲線,并得到直線回歸方程,將樣品的OD

 

 

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