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人白細(xì)胞介素-3(IL-3)ELISA試劑盒

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更新時間:2016-05-26 11:53:54瀏覽次數(shù):379次

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人白細(xì)胞介素-3(IL-3)ELISA試劑盒
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蔣菲菲:

人白細(xì)胞介素-3(IL-3)ELISA試劑盒

 

 

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實(shí)驗(yàn)原理

用純化的抗體包被微孔板,制成固相載體,往包被抗該指標(biāo)抗體的微孔中依次加入標(biāo)本或標(biāo)準(zhǔn)品、*化的抗該指標(biāo)抗體、HRP標(biāo)記的親和素,經(jīng)過*洗滌后用底物TMB顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的該指標(biāo)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度(OD,計(jì)算樣品濃度。

特異性:本試劑盒可同時檢測天然或重組的,且與其他相關(guān)蛋白無交叉反應(yīng)。

有效期:6個月

預(yù)期應(yīng)用:ELISA法定量測定血清、血漿、細(xì)胞培養(yǎng)上清或其它相關(guān)生物液體中的含量。

說明

1.試劑盒保存:-20較長時間不用時2-8頻繁使用時

2.濃洗滌液低溫保存會有鹽析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶。

3.中、英文說明書可能會有不*之處,請以英文說明書為準(zhǔn)。

4.剛開啟的酶聯(lián)板孔中可能會含有少許水樣物質(zhì),此為正常現(xiàn)象,不會對實(shí)驗(yàn)結(jié)果造成任何影響。

試劑盒組成及試劑配制

1.         酶聯(lián)板(Assay plate ):一塊(96

2.         標(biāo)準(zhǔn)品(Standard)2凍干品

3.         樣品稀釋液(Sample Diluent)1×20ml/瓶。

4.         *標(biāo)記抗體稀釋液(Biotin-antibody Diluent)1×10ml/瓶。

5.         辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素稀釋液 (HRP-avidin Diluent)1×10ml/瓶。

6.         *標(biāo)記抗體(Biotin-antibody)1×120μl/(1100)

7.         辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素(HRP-avidin)1×120μl/(1100)

8.         底物溶液(TMB Substrate)1×10ml/瓶。

9.         濃洗滌液(Wash Buffer)1×20ml/瓶,使用時每瓶用蒸餾水稀釋25倍。

10.     終止液(Stop Solution)1×10ml/(2N H2SO4)

在收集樣本前都必須有一個完整的計(jì)劃,必須清楚要檢測的成份是否足夠穩(wěn)定。對收集后當(dāng)天就進(jìn)行

檢測的樣本,及時儲存在4℃?zhèn)溆谩τ诟籼煸贆z測的樣本,及時分裝后凍存在-20℃?zhèn)溆茫袟l件的,-70℃凍存?zhèn)溆谩?biāo)本應(yīng)避免反復(fù)凍融。

液體類標(biāo)本: 包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清等。

1. 血清:

室溫血液自然凝固10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。

2. 血漿:

應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。

3. 尿液:

用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實(shí)行。

4. 細(xì)胞培養(yǎng)上清:

檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。

5. 培養(yǎng)細(xì)胞

檢測細(xì)胞內(nèi)的成份時,用PBSPH7.2-7.4)稀釋細(xì)胞懸液,細(xì)胞濃度達(dá)到100/ml左右。通過反復(fù)凍融或加入組織蛋白萃取試劑,以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。

6. 組織標(biāo)本

切割標(biāo)本后,稱取重量。加入一定量的PBSPH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆谩?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBSPH7.4),或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿化。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。

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