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小鼠抗甲狀腺過氧化物酶抗體(TPO-Ab)ELISA試劑盒

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小鼠抗甲狀腺過氧化物酶抗體(TPO-Ab)ELISA試劑盒
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蔣菲菲: :

小鼠抗甲狀腺過氧化物酶抗體(TPO-Ab)ELISA試劑盒

 

實驗開始前,各試劑均應平衡至室溫;試劑或樣品配制時,均需充分混勻,并盡量避免起泡。

1.加樣:分別設空白孔、標準孔、待測樣品孔。空白孔加樣品稀釋液100μl,余孔分別加標準品或待測樣品100μl,注意不要有氣泡,加樣時將樣品加于酶標板底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。給酶標板覆膜,37孵育2小時。為保證實驗結(jié)果有效性,每次實驗請使用新的標準品溶液。

2.棄去液體,甩干,每個孔中加入Detection Ab工作液 100μl(在使用前15分鐘內(nèi)配制,酶標板加上覆膜,37溫育1小時。

3.棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板 3次,每次浸泡1-2分鐘,大約350μl /每孔,甩干并在吸水紙上輕拍將孔內(nèi)液體拍干。

4.每孔加HRP Conjugate工作液臨用前15分鐘內(nèi)配制)100μl,加上覆膜,37溫育1小時。

5.棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板5次,方法同步驟3

6.每孔加底物溶液100μl,酶標板加上覆膜37避光孵育15分鐘左右根據(jù)實際顯色情況酌情縮短或延長,但不可超過30分鐘。當標準孔出現(xiàn)明顯梯度時,即可終止

7.每孔加終止液50μl,終止反應,此時藍色立轉(zhuǎn)黃色。終止液的加入順序應盡量與底物液的加入順序相同。

8.立即用酶標儀在450nm波長測量各孔的光密度(OD。應提前打開酶標儀電源,預熱儀器,設置好檢測程序。

9.實驗完畢后將未用完的試劑按規(guī)定的保存溫度放回冰箱保存至有效期結(jié)束。

洗滌方法:

1. 自動洗板機:每孔加入洗滌液350μl,注入與吸出間隔60秒。洗板5次。

2. 手工洗板:甩盡孔內(nèi)液體,在潔凈的吸水紙上拍干,每孔加洗滌液350μl,浸泡1-2分鐘,吸去不可觸及板壁或甩掉酶標板內(nèi)的液體,在厚的吸水紙上拍干。洗板5次。

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