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小鼠腫瘤壞死因子β(TNF-β)ELISA試劑盒

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更新時間:2016-04-27 02:41:48瀏覽次數:340次

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小鼠腫瘤壞死因子β(TNF-β)ELISA試劑盒
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操作步驟

1.  標準品的稀釋與加樣:在酶標包被板上設標準品孔 10 孔,在*、第二孔中分別加標

準品 100µl,然后在*、第二孔中加標準品稀釋液50µl,混勻;然后從*孔、第二

孔中各取 100µl分別加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液 50µl,

混勻;然后在第三孔和第四孔中先各取 50µl棄掉,再各取 50µl分別加到第五、第六孔

中,再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液 50ul,混勻;混勻后從第五、第六孔中各

50µl 分別加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液 50µl,混

勻后從第七、第八孔中分別取 50µl 加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分別加標準

品稀釋液 50µl,混勻后從第九第十孔中各取 50µl棄掉。(稀釋后各孔加樣量都為 50µl

濃度分別為 150 pg/mL100 pg/mL 50 pg/mL,25pg/mL,12.5 pg/mL)。

2.  加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、待測樣

品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40µl,然后再加待測樣品 10µl(樣

品zui終稀釋度為 5 倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混

勻。

3.  溫育:用封板膜封板后置37℃溫育 30 分鐘。

4.  配液:將 3048T 20倍)倍濃縮洗滌液用蒸餾水3048T 20倍)倍稀釋后備用。 

5.  洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置 30 秒后棄去,如此

重復 5次,拍干。

6.  加酶:每孔加入酶標試劑50µl,空白孔除外。

7.  溫育:操作同 3。

8.  洗滌:操作同 5。

9.  顯色:每孔先加入顯色劑 A50µl,再加入顯色劑 B50µl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色

15 分鐘.  

10.  終止:每孔加終止液 50µl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。

11.  測定:以空白空調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD 值)。 測定應在加終止

液后 15 分鐘以內進行。

注意事項:

新鮮標本盡早檢測,對收集后當天就進行檢測的標本,及時儲存在4℃備用,如有特殊原因需要周期收集標本,請造模取材后,將標本及時分裝后放在-20℃或-80℃條件下保存。因冰室與室溫存在一定溫差,蛋白極易降解,直接影響實驗質量,所以避免反復凍融。

安全性:

1 避免直接接觸終止液和底物。如不小心接觸到這些液體,請盡快用水沖洗。

2 實驗中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。

3 不要用嘴接觸試劑盒里的任何成份。

4 Elisa試劑盒請遠離兒童

自備物品:

1 、 37 恒溫箱2 標準規格酶標儀3 精密移液器及一次性吸頭4 、 蒸餾水

5 、 一次性試管6 、 吸水紙

 

 

 

 

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