小鼠腫瘤壞死因子β（TNF-β）ELISA試劑盒

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操作步驟

1.  標準品的稀釋與加樣：在酶標包被板上設標準品孔 10 孔，在*、第二孔中分別加標

準品 100µl，然后在*、第二孔中加標準品稀釋液50µl，混勻；然后從*孔、第二

孔中各取 100µl分別加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液 50µl，

混勻；然后在第三孔和第四孔中先各取 50µl棄掉，再各取 50µl分別加到第五、第六孔

中，再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液 50ul，混勻；混勻后從第五、第六孔中各

取 50µl 分別加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液 50µl，混

勻后從第七、第八孔中分別取 50µl 加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分別加標準

品稀釋液 50µl，混勻后從第九第十孔中各取 50µl棄掉。（稀釋后各孔加樣量都為 50µl，

濃度分別為 150 pg/mL，100 pg/mL ，50 pg/mL，25pg/mL，12.5 pg/mL）。

2.  加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、待測樣

品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40µl，然后再加待測樣品 10µl（樣

品zui終稀釋度為 5 倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混

勻。

3.  溫育：用封板膜封板后置37℃溫育 30 分鐘。

4.  配液：將 30（48T的 20倍）倍濃縮洗滌液用蒸餾水30（48T的 20倍）倍稀釋后備用。 

5.  洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置 30 秒后棄去，如此

重復 5次，拍干。

6.  加酶：每孔加入酶標試劑50µl，空白孔除外。

7.  溫育：操作同 3。

8.  洗滌：操作同 5。

9.  顯色：每孔先加入顯色劑 A50µl，再加入顯色劑 B50µl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色

15 分鐘.  

10.  終止：每孔加終止液 50µl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。

11.  測定：以空白空調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）。 測定應在加終止

液后 15 分鐘以內進行。

注意事項：

新鮮標本盡早檢測，對收集后當天就進行檢測的標本，及時儲存在4℃備用，如有特殊原因需要周期收集標本，請造模取材后，將標本及時分裝后放在-20℃或-80℃條件下保存。因冰室與室溫存在一定溫差，蛋白極易降解，直接影響實驗質量，所以避免反復凍融。

安全性：

1． 避免直接接觸終止液和底物。如不小心接觸到這些液體，請盡快用水沖洗。

2． 實驗中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。

3． 不要用嘴接觸試劑盒里的任何成份。

4 Elisa試劑盒請遠離兒童

自備物品：

1 、 37 ℃ 恒溫箱2 、 標準規格酶標儀3 、 精密移液器及一次性吸頭4 、 蒸餾水

5 、 一次性試管6 、 吸水紙