小鼠酸性成纖維細胞生長因子1(aFGF-1)ELISA試劑盒
【操作步驟】 1、準備:從冰箱取出試劑盒,室溫復溫平衡30分鐘。 2、配液:用蒸餾水將20倍濃縮洗滌液稀釋成原倍的洗滌液。 3、加標準品和待測樣本:取足夠數量的酶標包被板,固定于框架上,分別設置標準品孔、待測樣本孔和空白對照孔,記錄各孔位置,在標準品孔中加入標準品50μL;待測樣本孔中先加入待測樣本10μL,再加*40μL(即樣本稀釋5倍);空白對照孔不加。 4、溫育:37℃水浴鍋或恒溫箱溫育30min。 5、洗板:棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液,靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復洗板4次(也可用洗板機按說明書操作洗板)。 6、加酶標工作液:每孔加入酶標工作液50μL,空白對照孔不加。 7、溫育:重復4的操作。 8、洗板:重復5的操作。 9、顯色:每孔先加入顯色劑A 液50μL,再加入顯色劑B液 50μL,37℃避光顯色15min。 10、終止:取出酶標板,每孔加終止液50μL,終止反應(顏色由藍色立轉黃色)。 11、測定:以空白孔調零,在終止后15分鐘內,用450nm波長測量各孔的吸光值(OD值)。 12、計算:根據標準品的濃度及對應的OD值,計算出標準曲線的直線回歸方程,再根據樣本的OD值,在回歸方程上計算出對應的樣品濃度,也可以使用各種應用軟件來計算。zui終濃度為實際測定濃度乘以稀釋倍數。 【樣本要求】 1、樣本不能含疊氮鈉(NaN3),因為疊氮鈉(NaN3)是辣根過氧化物酶(HRP)的抑制劑。 2、標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能立即試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融。 3、樣本應充分離心,不得有溶血及顆粒。
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