小鼠組織相容性抗原(HLA-2)ELISA試劑盒
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操作步驟: 1. 編號:將樣品對應微孔按序編號,每板應設陰性對照2孔、陽性對照2孔、空白對照1孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同) 2. 加樣:分別在陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照50μl。然后在待測樣品孔先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻, 3. 溫育:用封板膜封板后置 4. 配液:將30(48T的20倍)倍濃縮洗滌液加蒸餾水至600ml后備用 5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。 6. 加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。 7. 溫育:操作同3。 8. 洗滌:操作同5。 9. 顯色:每孔先加入顯色劑A 50μl,再加入顯色劑B 50μl,輕輕震蕩混勻, 10. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。 11. 測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。 結果判定: 試驗有效性:陽性對照孔平均值≥1.00; 陰性對照平均值≤0.10 臨界值(CUT OFF)計算:臨界值=陰性對照孔平均值+0.15 陰性判定:樣品OD值< 臨界值(CUT OFF)者為免疫缺陷病(FIV)陰性 陽性判定:樣品OD值≥ 臨界值(CUT OFF)者為免疫缺陷病(FIV)陽性 注意事項 1.操作嚴格按照說明書進行,本試劑不同批號組分不得混用。 2.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存。 3.濃洗滌液可能會有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結果。 4. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。 5.底物請避光保存。 6.試驗結果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準,使用雙波長檢測時,參考波長為630nm 7.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。終止液為