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小鼠白細(xì)胞抗原B27(HLA-B27)ELISA試劑盒

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更新時(shí)間:2016-05-27 09:43:32瀏覽次數(shù):370次

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小鼠白細(xì)胞抗原B27(HLA-B27)ELISA試劑盒
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蔣菲菲: :

小鼠白細(xì)胞抗原B27(HLA-B27)ELISA試劑盒

 

 

操作步驟:

1.         編號(hào):將樣品對(duì)應(yīng)微孔按序編號(hào),每板應(yīng)設(shè)陰性對(duì)照2孔、陽(yáng)性對(duì)照2孔、空白對(duì)照1孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)

2.         加樣:分別在陰、陽(yáng)性對(duì)照孔中加入陰性對(duì)照、陽(yáng)性對(duì)照50μl。然后在待測(cè)樣品孔先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測(cè)樣品10μl加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻,

3.         溫育:用封板膜封板后置37溫育30分鐘。

4.         配液:將3048T20倍)倍濃縮洗滌液加蒸餾水至600ml后備用

5.         洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。

6.         加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外。

7.         溫育:操作同3

8.         洗滌:操作同5

9.         顯色:每孔先加入顯色劑A 50μl,再加入顯色劑B 50μl,輕輕震蕩混勻,37避光顯色15分鐘

10.     終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。

11.     測(cè)定:以空白空調(diào)零,450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度(OD值)。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。

 

結(jié)果判定:

試驗(yàn)有效性:陽(yáng)性對(duì)照孔平均值≥1.00; 陰性對(duì)照平均值≤0.10

臨界值(CUT OFF)計(jì)算:臨界值=陰性對(duì)照孔平均值+0.15

陰性判定:樣品OD< 臨界值(CUT OFF)者為免疫缺陷病(FIV)陰性

陽(yáng)性判定:樣品OD臨界值(CUT OFF)者為免疫缺陷病(FIV)陽(yáng)性

注意事項(xiàng)

1.操作嚴(yán)格按照說(shuō)明書進(jìn)行,本試劑不同批號(hào)組分不得混用。

2.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。

3.濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出,稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶,洗滌時(shí)不影響結(jié)果。

4.  封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

5.底物請(qǐng)避光保存。

6.試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn),使用雙波長(zhǎng)檢測(cè)時(shí),參考波長(zhǎng)為630nm

7.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。終止液為2M的硫酸,使用時(shí)必須注意安全。

 

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