小鼠絲裂原活化蛋白激酶（MAPK）ELISA試劑盒

酶聯(lián)免疫分析（ELISA試劑盒）組成：

靈敏度：具體請查看說明書.
產(chǎn)品用途: 科研ELISA檢測試劑盒.提供實驗代測服務(wù).

標(biāo)本收集注意事項：

1） 在收集標(biāo)本前都必須有一個完整的計劃，必須清楚要檢測的成份是否足夠穩(wěn)定。

2） 我們提倡新鮮標(biāo)本盡早檢測，對收集后及時進(jìn)行檢測。

elisa試劑盒的優(yōu)點：

一、高效、靈敏、特異的抗體；

二、穩(wěn)定的重復(fù)性和可靠性；

三、吸附性能好，空白值低，孔底透明度高的固相載體；

四、適用血清、血漿、組織勻漿液、細(xì)胞培養(yǎng)上清液、尿液等等多種標(biāo)本類型；

五、zui大限度的節(jié)省實驗經(jīng)費。

卡邁舒生物ELISA（酶聯(lián)免疫）試劑盒服務(wù)承諾：

一、產(chǎn)品質(zhì)量保證，有問題免費包換

二、提供免費代測服務(wù)（提供來樣檢測服務(wù)，zui大限度實驗結(jié)果的有效性節(jié)約您的實驗時間）

三、提供全程技術(shù)指導(dǎo)。

標(biāo)本收集:

　　1. 收集血液的試管應(yīng)為一次性的無熱原，無內(nèi)毒素試管。

　　2. 血漿抗凝劑*使用EDTA。避免使用溶血，高血脂標(biāo)本。

　　3. 標(biāo)本應(yīng)清澈透明，懸浮物應(yīng)離心去除。

　　4. 標(biāo)本收集后若不及時檢測，請按一次使用量分裝，凍存于-20℃，-70℃電冰箱內(nèi)，避免反復(fù)凍融，3-6月內(nèi)檢測。

　　5. 如果您的樣本中檢測物濃度高于標(biāo)準(zhǔn)品zui高值，請根據(jù)實際情況，做適當(dāng)倍數(shù)稀釋（建 議做預(yù)實驗，以確定稀釋倍數(shù)）。

　　注意事項:

　　1. 試劑盒使用前請保存在2-8℃。復(fù)溶后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)分裝后，將其放在-20～-70℃貯存。

　　2. 濃縮*化抗體，濃縮酶結(jié)合物體積小，運輸中顛簸和可能的倒置，會使液體沾到管壁 或瓶蓋。因此使用前請用手甩幾下或1000轉(zhuǎn)/分離心1分鐘，以使附著管壁或瓶蓋的液體沉積到管底。取用前，請用移液器小心吹打4-5次使溶液混勻。

　　3. 從冰箱中取出的濃縮洗滌液可能有結(jié)晶,屬于正常現(xiàn)象，微加熱至40℃使結(jié)晶*溶解后 再配制洗滌液。（加熱溫度不要超過50℃）使用時洗滌液應(yīng)為室溫。

　　4. 若需要分次使用標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)按照每一次用量分裝，將其放在-20～-70℃貯存。避免反復(fù)凍 融。

　　5. 不同批號的試劑盒組份不能混用（洗滌液和反應(yīng)終止液除外）。

　　6. 充分輕微混勻?qū)Ψ磻?yīng)結(jié)果尤為重要，使用微量振蕩器（使用zui低頻率），如無微量振蕩器，可在反應(yīng)前手工輕輕敲擊酶標(biāo)板框混勻。

　　7. 在試驗中標(biāo)準(zhǔn)品和樣本檢測時建議作雙孔檢測。

　　8. 試驗中所用的試管和吸頭均為一次性使用，嚴(yán)禁在不同的液體之間混用！否則將影響試 驗結(jié)果。

　　9. 試驗中請穿著試驗服并帶乳膠手套做好防護工作。特別是檢測血液或者其他體液標(biāo)本時， 請按國家生物試驗室安全防護條列執(zhí)行。

　　檢測前準(zhǔn)備工作:

　　1. 請?zhí)崆?/span>20分鐘從冰箱中取出試劑盒，以平衡至室溫。

　　2. 將濃縮洗滌液用雙蒸水稀釋（1:20）。未用完的放回4℃。

　　3. 標(biāo)準(zhǔn)品: 加入標(biāo)準(zhǔn)品/標(biāo)本稀釋液0.5ml至凍干標(biāo)準(zhǔn)品中，靜置15分鐘，待其充分溶解后，輕輕混勻（濃度為1000 pg/ml）。然后根據(jù)需要進(jìn)行稀釋。（建議標(biāo)準(zhǔn)曲線使用以下濃度： 1000、500、250、125、62.5、31.25、15.6、0 pg/ml）。復(fù)溶標(biāo)準(zhǔn)品原液（1000 pg/ml）若未用完請分裝后放入-20℃以下電冰箱內(nèi)保存，保存兩個月。已稀釋的標(biāo)準(zhǔn)品請廢棄。

　　4. *化抗體工作液：按當(dāng)次試驗所需要得用量，使用前20分鐘，以*化抗體稀釋液稀釋濃縮*化抗體（1:30）成工作濃度。當(dāng)日使用。若實驗次數(shù)過多導(dǎo)致*化 抗體量不足，可向我們公司單獨購買*化抗體。（須提供抗體批號）

　　5. 酶結(jié)合物工作液：按當(dāng)次試驗所需要得用量，使用前20分鐘，以酶結(jié)合物稀釋液稀釋濃 縮酶結(jié)合物（1:30） 成工作濃度。當(dāng)日使用。若實驗次數(shù)過多導(dǎo)致濃縮酶結(jié)合物量不足， 可向我們公司單獨購買濃縮酶結(jié)合物。（須提供酶結(jié)合物批號）

　　洗滌方法:

　　1. 自動洗板機：要求注入的洗滌液為350ul，注入與吸出間隔15－30秒。洗板5次。

　　2. 手工洗板：甩盡孔內(nèi)液體，在潔凈的吸水紙上拍干，每孔加洗滌液350ul，靜置30秒后甩盡液體，在厚迭吸水紙上拍干。洗板5次。

　　操作步驟:

　　1．從已平衡至室溫的密封袋中取出試驗所需板條，未用的板條和干燥劑請放回鋁箔袋內(nèi)壓 實自封條，密封口袋，放回4℃。

　　2．空白孔加標(biāo)準(zhǔn)品和標(biāo)本稀釋液，其余相應(yīng)孔中加標(biāo)本或不同濃度標(biāo)準(zhǔn)品（100ul/孔），用封板膠紙封住反應(yīng)孔，36℃孵箱孵育90分鐘。

　　3．提前20分鐘準(zhǔn)備*化抗體工作液。

　　4．洗板5次。

　　5．空白孔加*化抗體稀釋液，其余孔加入*化抗體工作液（100ul/孔）。用新封板膠紙封住反應(yīng)孔，36℃孵箱孵育60分鐘。

　　6．提前20分鐘準(zhǔn)備酶結(jié)合物工作液。避光室溫（22-25 ） ℃ 放置。

　　7．洗板5次。

　　8．空白孔加酶結(jié)合物稀釋液，其余孔加入酶結(jié)合物工作液（100ul/孔）。用新封板膠紙封住反應(yīng)孔，36℃孵箱，避光孵育30分鐘。

　　9．打開酶標(biāo)儀電源，預(yù)熱儀器，設(shè)置好檢測程序。

　　10．洗板5次。

　　11．加入顯色底物（TMB）100ul/孔，避光36℃孵箱，避光孵育15分鐘。

　　12．加入終止液100ul/孔, 混勻后即刻測量OD450值（3分鐘內(nèi)）。在儀器保存讀數(shù)結(jié)果并打印一份紙質(zhì)結(jié)果。

　　13．實驗完畢后將未用完的試劑按規(guī)定的保存溫度放回電冰箱保存至有效期結(jié)束。

　　建議保存酶標(biāo)板框，以備下次或者今后試驗使用。

　　結(jié)果判斷:

　　1. 每個標(biāo)準(zhǔn)品和標(biāo)本的OD值應(yīng)減去空白孔的OD值。

　　2. 手工繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。以標(biāo)準(zhǔn)品濃度作橫坐標(biāo)，OD值作縱坐標(biāo)，以平滑線連接各標(biāo)準(zhǔn)品的坐標(biāo)點。通過標(biāo)本的OD值可在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出其濃度。

3. 若標(biāo)本OD值高于標(biāo)準(zhǔn)曲線上限，應(yīng)適當(dāng)稀釋后重測，計算濃度時應(yīng)乘以稀釋倍數(shù)。

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