1.DMSO之等級和無菌過濾之方式為何？

冷凍保存使用的DMSO等級，必須為Tissueculturegrade的DMSO(如SigmaD2650)，其本身即為無菌狀況，*次開瓶后應立即少量分裝于無菌試管中，保存于4°C，避免反復冷凍解凍造成DMSO之裂解而釋出有害物質，并可減少污染之機會。若要過濾DMSO，則須使用耐DMSO之Nylon材質濾膜。

2.冷凍保存細胞之方法？

冷凍保存方法一:冷凍管置于4°C30-0分鐘→(-20°C30分鐘*)→-80°C16~18小時(或隔夜)→液氮槽vaporphase*儲存。冷凍保存方法二:冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3°C至–80 °C以下，再放入液氮槽vaporphase*儲存。*-20°C不可超過1小時，以防止冰晶過大，造成細胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80°C冰箱中，惟存活率稍微降低一些。

3.細胞欲冷凍保存時，細胞冷凍管內應有多少細胞濃度？

冷凍管內細胞數目一般為1x10⁶cells/mlvial，融合瘤細胞則以5x10⁶cells/mlvial為宜。

4. 應如何避免細胞污染？

細胞污染的種類可分成細菌、酵母菌、霉菌、病毒和霉漿菌。主要的污染原因為無菌操作技術不當、操作室環境不佳、污染之血清和污染之細胞等。嚴格之無菌操作技術、清潔的環境、與品質良好之細胞來源和培養基配制是減低污染之方法。

5.如果細胞發生微生物污染時，應如何處理？

直接滅菌后丟棄之。

6.支原體(mycoplasma)污染的細胞，是否能以肉眼觀察出異狀？

不能。

除極有經驗之專家外，大多數遭受支原體污染的細胞株，無法以其外觀分辨之。

7.支原體污染會對細胞培養有何影響？

支原體污染幾乎可影響所有細胞之生長參數，代謝及研究之任一數據。故進行實驗前，必須確認細胞為mycoplasma-free，實驗結果之數據方有意義。

8.偵測出細胞株有支原體污染時，該如何處理？

直接滅菌后丟棄，以避免污染其它細胞株。

9.CO2培養箱之水盤如何保持清潔？

定期(至少每兩周一次)以無菌蒸餾水或無菌去離子水更換之。

10.為何培養基保存于4°C冰箱中，顏色會偏暗紅色，且pH值會越來越偏堿性？

培養基保存于4°C冰箱中，培養基內之CO2會逐漸溢出，造成培養基越來越偏堿性。而培養基中之酸堿指示劑(通常為phenolred)的顏色也會隨堿性增加而更偏暗紅。培養基偏堿之結果，將造成細胞生長停滯或死亡。若培養基偏堿時，可以通入無菌過濾之CO2，以調整pH值。或加入*調整PH值。

-----------------------------------------------------------------------------------------

上海子實生物科技有限公司是一家專注于生物醫藥的科研產品研究、開發、生產和銷售的高科技企業。公司自成立以來便一直秉承“精品、專業、誠信、便捷”的宗旨和理念，不斷的開拓進取，務實創新，收錄與典藏了近千種各類細胞株/系，其中自主研發建系各類示蹤細胞、耐藥株細胞、基因敲除細胞等百余種，客戶遍及全國各地的醫院、高校、藥廠、科研機構等，產品質量與/服務體系深受廣大客戶信任和青瞇。目前公司以細胞生物學產品為主體，陸續建立與開發了：細胞STR檢測試劑盒、PDX人源腫瘤細胞異體移植技術、荷瘤動物/特殊疾病動物模型等新產品和技術體系，為廣大客戶提供更多更好的科研產品和服務。子實期待與您的合作……長按圖片掃描二維碼，取得關注。按公眾號歷史信息有更多精彩內容。

1.DMSO之等級和無菌過濾之方式為何？

冷凍保存使用的DMSO等級，必須為Tissueculturegrade的DMSO(如SigmaD2650)，其本身即為無菌狀況，*次開瓶后應立即少量分裝于無菌試管中，保存于4°C，避免反復冷凍解凍造成DMSO之裂解而釋出有害物質，并可減少污染之機會。若要過濾DMSO，則須使用耐DMSO之Nylon材質濾膜。

2.冷凍保存細胞之方法？

冷凍保存方法一:冷凍管置于4°C30-0分鐘→(-20°C30分鐘*)→-80°C16~18小時(或隔夜)→液氮槽vaporphase*儲存。冷凍保存方法二:冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3°C至–80 °C以下，再放入液氮槽vaporphase*儲存。*-20°C不可超過1小時，以防止冰晶過大，造成細胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80°C冰箱中，惟存活率稍微降低一些。

3.細胞欲冷凍保存時，細胞冷凍管內應有多少細胞濃度？

冷凍管內細胞數目一般為1x10⁶cells/mlvial，融合瘤細胞則以5x10⁶cells/mlvial為宜。

4. 應如何避免細胞污染？

細胞污染的種類可分成細菌、酵母菌、霉菌、病毒和霉漿菌。主要的污染原因為無菌操作技術不當、操作室環境不佳、污染之血清和污染之細胞等。嚴格之無菌操作技術、清潔的環境、與品質良好之細胞來源和培養基配制是減低污染之方法。

5.如果細胞發生微生物污染時，應如何處理？

直接滅菌后丟棄之。

6.支原體(mycoplasma)污染的細胞，是否能以肉眼觀察出異狀？

不能。

除極有經驗之專家外，大多數遭受支原體污染的細胞株，無法以其外觀分辨之。

7.支原體污染會對細胞培養有何影響？

支原體污染幾乎可影響所有細胞之生長參數，代謝及研究之任一數據。故進行實驗前，必須確認細胞為mycoplasma-free，實驗結果之數據方有意義。

8.偵測出細胞株有支原體污染時，該如何處理？

直接滅菌后丟棄，以避免污染其它細胞株。

9.CO2培養箱之水盤如何保持清潔？

定期(至少每兩周一次)以無菌蒸餾水或無菌去離子水更換之。

10.為何培養基保存于4°C冰箱中，顏色會偏暗紅色，且pH值會越來越偏堿性？

培養基保存于4°C冰箱中，培養基內之CO2會逐漸溢出，造成培養基越來越偏堿性。而培養基中之酸堿指示劑(通常為phenolred)的顏色也會隨堿性增加而更偏暗紅。培養基偏堿之結果，將造成細胞生長停滯或死亡。若培養基偏堿時，可以通入無菌過濾之CO2，以調整pH值。或加入*調整PH值。

-----------------------------------------------------------------------------------------

上海子實生物科技有限公司是一家專注于生物醫藥的科研產品研究、開發、生產和銷售的高科技企業。公司自成立以來便一直秉承“精品、專業、誠信、便捷”的宗旨和理念，不斷的開拓進取，務實創新，收錄與典藏了近千種各類細胞株/系，其中自主研發建系各類示蹤細胞、耐藥株細胞、基因敲除細胞等百余種，客戶遍及全國各地的醫院、高校、藥廠、科研機構等，產品質量與/服務體系深受廣大客戶信任和青瞇。目前公司以細胞生物學產品為主體，陸續建立與開發了：細胞STR檢測試劑盒、PDX人源腫瘤細胞異體移植技術、荷瘤動物/特殊疾病動物模型等新產品和技術體系，為廣大客戶提供更多更好的科研產品和服務。子實期待與您的合作……長按圖片掃描二維碼，取得關注。按公眾號歷史信息有更多精彩內容。