ELISA是酶聯(lián)接免疫吸附劑測(cè)定（ Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay ）的簡(jiǎn)稱。它是繼免疫熒光和放射免疫技術(shù)之后發(fā)展起來(lái)的一種免疫酶技術(shù)。此項(xiàng)技術(shù)自70年代初問(wèn)世以來(lái)，發(fā)展十分迅速，目前已被廣泛用于生物學(xué)和醫(yī)學(xué)科學(xué)的許多領(lǐng)域。

　　溫育是ELISA 測(cè)定中影響測(cè)定成敗zui為關(guān)鍵的一個(gè)因素。

　　溫育所需時(shí)間與溫度成反比，即溫度越高，則所需時(shí)間相對(duì)較短。zui為常用的溫育溫度有37℃和室溫，其次是43℃和2～8℃。 溫育這一步是臨ELISA 測(cè)定中zui容易出現(xiàn)問(wèn)題的步驟。通常目前國(guó)內(nèi) ELISA 商品試劑盒的反應(yīng)溫育時(shí)間為37℃ 30分鐘～1小時(shí)， 則通常為37℃ 1～2小時(shí)才能有較*的結(jié)合，低于1小時(shí)，可能會(huì)影響測(cè)定下限。

　　操作注意事項(xiàng)

　　1、要保證在設(shè)定的溫度下有足夠的反應(yīng)時(shí)間 一般來(lái)說(shuō)，加完樣本和（或）反應(yīng)試劑后，將 微孔板從室溫拿至水浴箱或溫箱中時(shí)，孔內(nèi)溫度從室溫升37℃，需要一定的時(shí)間，尤其是在室溫比較低以及非水浴的狀態(tài)下，這段升溫時(shí)間可能還比較長(zhǎng)，而在臨床實(shí)驗(yàn)室中，很少有天 室內(nèi)溫度較低有關(guān)，此時(shí)微孔板轉(zhuǎn)入溫箱后37℃溫育時(shí)間不夠，以致弱陽(yáng)性樣本測(cè)定為陰性。

　　2、溫育溫度的選擇 在有的ELISA 試劑盒的說(shuō)明書(shū)中，指出溫育溫度可有兩種，例如，一種是37℃下1h，另一種則為43℃下45min。因此，我們建議在臨床 ELISA 測(cè)定中盡量使用較低溫育溫度較長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間的條件。

　　3、在實(shí)驗(yàn)室的常規(guī)ELISA 測(cè)定中，將板從室溫（通常在25℃左右）臵于37℃溫箱， 板孔升溫時(shí)，在外周孔與中心孔之間可能存在一熱力學(xué)梯度。因此使用水浴或在將反應(yīng)溶液加入至板孔中時(shí)，將板和溶液均加。