牛葡萄糖6磷酸脫氫酶(G6PD)ELISA試劑盒

操作步驟：

實驗開始前，各試劑均應平衡至室溫（試劑不能直接在37℃溶解）；試劑或樣品稀釋時，均需混勻，混勻時盡量避免起泡。實驗前應預測樣品含量，如樣品濃度過高時，應對樣品進行稀釋，以使稀釋后的樣品符合試劑盒的檢測范圍，計算時再乘以相應的稀釋倍數。

1. 加樣：分別設空白孔、標準孔、待測樣品孔。空白孔加樣品稀釋液100μl，余孔分別加標準品或待測樣品100μl，注意不要有氣泡，加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻，酶標板加上蓋或覆膜，37℃反應120分鐘。為保證實驗結果有效性，每次實驗請使用新的標準品溶液。

2. 棄去液體，甩干，不用洗滌。每孔加檢測溶液A工作液 100μl（在使用前一小時內配制），酶標板加上覆膜, 37℃反應60分鐘。

3. 溫育60分鐘后，棄去孔內液體，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分鐘，大約400μl/每孔，甩干（也可輕拍將孔內液體拍干）。

4. 每孔加檢測溶液B工作液（同檢測A工作液） 100μl，酶標板加上覆膜37℃反應60分鐘。

5. 溫育60分鐘后，棄去孔內液體，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分鐘，350μl/每孔，甩干（也可輕拍將孔內液體拍干）。

6. 依序每孔加底物溶液90μl，酶標板加上覆膜37℃避光顯色（30分鐘內，此時肉眼可見標準品的前3-4孔有明顯的梯度蘭色，后3-4孔梯度不明顯，即可終止）。

7. 依序每孔加終止溶液50μl，終止反應，此時藍色立轉黃色。終止液的加入順序應盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實驗結果的準確性，底物反應時間到后應盡快加入終止液。

8. 用酶聯儀在450nm波長依序測量各孔的光密度（OD值）。 在加終止液后立即進行檢測。

牛葡萄糖6磷酸脫氫酶(G6PD)ELISA試劑盒

ELISA試驗中，各種檢驗項目的誤差允許范圍均有待在實踐中得出結論，以上只是舉例說明質控方法，不是定論。2SD是一般*的允許誤差限度。每批測定放一份質控血清時，一次超過2SD應作為"告警"，二次超出2SD為"失控"。當質控過程中，出現失控時，出現失控時，應查找原因，通常是試劑盒或質控血清失效造成。更換試劑盒或更換質控血清，找出原因糾正后重新檢驗。如果檢驗結果仍達不到要求或找不到原 因時，應重復進行OCV的檢驗。如果OCV檢驗的結果仍是好的，說明常規操作出現問題。一般認為：①一次超出3SD；②連續二次超出2SD；③3-5次連續處于一側的2SD之內；④5～7次連續偏向橫軸的一側，均為失控。第③、④種情況，單獨依靠記錄往往是不易察覺的，但在質控圖上可以清晰地發現這種失控。

牛葡萄糖6磷酸脫氫酶(G6PD)ELISA試劑盒