超氧化物歧化酶SOD測試盒(WST-8法)_分光法

測定方法：分光光度法

產品規格：50管/48樣

注　意：正式測定前務必取 2-3 個預期差異較大的樣本做預測定

測定意義：

SOD（EC 1.15.1.1）廣泛存在于動物、植物、微生物和培養細胞中，催化超氧化物陰離子發生岐化作用，生成 H2O2 和 O2。SOD 不僅是超氧化物陰離子清除酶，也是 H2O2 主要生成酶，在生物抗氧化系統中具有重要作用。

超氧化物歧化酶SOD測試盒(WST-8法)_分光法

測定原理：

通過氧化酶反應系統產生超氧陰離子(O2-.)，O2-.可與 WST-8 反應產生水溶性染料甲臜，后者在 450nm 處有吸收；SOD 可清除 O2-.，從而抑制了甲臜的形成；反應液越深，說明 SOD 活性愈低，反之活性越高。

需自備的儀器和用品：

分光光度計、離心機、移液器、1mL 玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水

試劑的組成和配制：

提取液：液體 60mL×1 瓶，4℃保存；

試劑一：液體 50mL×1 瓶，4℃避光保存；

試劑二：液體 300μL×1 支，4℃避光保存；

試劑三：液體 100μL×1 支，4℃保存；

試劑四：粉劑×2 瓶，4℃保存。

粗酶液提取：

1、細菌、細胞或組織樣品的制備：

細菌或培養細胞：先收集細菌或細胞到離心管內，離心后棄上清；按照細菌或細胞數量（104 個）：提取液體積（mL）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬細菌或細胞加入 1mL 提取液），超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率 20％或 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復 30 次）； 8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。

組織：按照組織質量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1mL 提取液），進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。

2、血清（漿）樣品：直接檢測。

測定步驟：

1、 分光光度計預熱 30min 以上，調節波長至 450nm，蒸餾水調零。

2、 試劑三的稀釋：將試劑三用蒸餾水稀釋 50 倍，用多少配多少。（試劑三和蒸餾水 1：49稀釋。

3、 工作液配制：在試劑一加入 250μL 試劑二，充分混勻。配好的試劑 4℃避光可保存一周。（若一次性測定樣本較少，可按照實際用量將試劑一和試劑二按照 20mL：0.1mL 的比例混勻配制）

4、將一瓶試劑四用 5mL 蒸餾水溶解（溶解后一周內用完）

5、樣本測定（在 1mL 玻璃比色皿中依次加入下列試劑）