超氧化物歧化酶(SOD)測(cè)試盒(NBT法)_分光法
測(cè)定方法：分光光度法
產(chǎn)品規(guī)格：50管/48樣
注 意：正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定
超氧化物歧化酶(SOD)測(cè)試盒(NBT法)_分光法
測(cè)定意義：
SOD（EC 1.15.1.1）廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中，催化超氧化物陰離子發(fā)生岐化作用，生成 H2O2 和 O2。SOD 不僅是超氧化物陰離子清除酶，也是 H2O2 主要生成酶，在生物抗氧化系統(tǒng)中具有重要作用。
測(cè)定原理：
通過(guò)氧化酶反應(yīng)系統(tǒng)產(chǎn)生超氧陰離子(O2-.)，O2-.可還原氮藍(lán)四唑生成藍(lán)色甲臜，后者在 560nm 處有吸收；SOD 可清除 O2-.，從而抑制了甲臜的形成；反應(yīng)液藍(lán)色越深，說(shuō)明 SOD 活性愈低，反之活性越高。
需自備的儀器和用品：
可見(jiàn)分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1mL 玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水
試劑的組成和配制：
提取液：液體 60mL×1 瓶，4℃保存；
試劑一：液體 15mL×1 瓶，4℃保存；
試劑二：液體 350μL×1 支，4℃保存；
試劑三：液體 10mL×1 瓶，4℃保存；
試劑四：粉劑×2 瓶，4℃保存。
粗酶液提取：
1、細(xì)菌、細(xì)胞或組織樣品的制備：
細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞：先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量（104 個(gè)）：提取液體積（mL）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL 提取液），超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴，功率 20％或 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復(fù) 30 次）； 8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測(cè)。
組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1mL 提取液），進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測(cè)。
2、血清（漿）樣品：直接檢測(cè)。
測(cè)定步驟：
1、 分光光度計(jì)預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至 560nm，蒸餾水調(diào)零。
2、 將試劑二用蒸餾水稀釋兩倍，用多少配多少。（試劑二和蒸餾水 1：1 稀釋）
3、 將一瓶試劑四用 5mL 蒸餾水溶解（溶解后一周內(nèi)用完），再用蒸餾水稀釋 4 倍，用多少配多少（試劑四和蒸餾水 1：3 稀釋）。
4、 測(cè)定前將試劑一、三和四在 37℃（哺乳動(dòng)物）或 25℃（其他物種）水浴 5min 以上。
