過氧化氫酶CAT測試盒(鉬酸銨比色法)_分光法
測定方法:分光光度法
產品規格:50管/24樣
測定意義:
CAT(EC 1.11.1.6)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養細胞中,是主要的H2O2清除酶,在活性氧清除系統中具有重要作用。
過氧化氫酶CAT測試盒(鉬酸銨比色法)_分光法
測定原理:
過氧化氫能氧化MoO42-成MoO52-,MoO52-接受氫氧根的電子成鍵,分子間立即脫水縮合,得到穩定的復合物(H2MoO4·XH2O)n在405nm處有強烈吸收峰,其吸光值和過氧化氫濃度成線性關系。測定出體系剩余過氧化氫在405nm的吸光值即可反映CAT的催化活性。
需自備的儀器和用品:
可見分光光度計、臺式離心機、可調式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水
試劑組成和配制:
提取液:液體60 mL×1瓶,4℃保存;
試劑一:液體6 mL×1瓶,4℃避光保存;
試劑二:液體18 mL×1瓶,常溫保存;
試劑三:液體45 mL×1瓶,4℃保存;
粗酶液提取:
1、細菌、細胞或組織樣品的制備:
細菌或培養細胞:先收集細菌或細胞到離心管內,離心后棄上清;按照細菌或細胞數量(104個):提取液體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬細菌或細胞加入1mL提取液),超聲波破碎細菌或細胞(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復30次);8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。
組織:按照組織質量(g):提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液),進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。
2、血清(漿)樣品:直接檢測。