丙二醛MDA測試盒_氧化與抗氧化系列_分光法
測定方法:分光光度法
產品規格:50管/48樣
注 意:正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定
測定意義:
氧自由基作用于脂質的不飽和脂肪酸,生成過氧化脂質;后者逐漸分解為一系列復雜的化合物,其中包括MDA。通過檢測MDA的水平即可檢測脂質氧化的水平。
丙二醛MDA測試盒_氧化與抗氧化系列_分光法
測定原理:
MDA與硫代(thiobarbituric acid,TBA)縮合,生成紅色產物,在532nm有大吸收峰,進行比色后可估測樣品中過氧化脂質的含量;同時測定600nm下的吸光度,利用532nm與600nm下的吸光度的差值計算MDA的含量。
需自備的儀器和用品:
可見分光光度、水浴鍋、臺式離心機、可調式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
試劑的組成和配置:
提取液:液體60mL×1瓶,4℃保存;
試劑一:液體40mL×1瓶,4℃保存;
注意事項:
臨用前注意試劑一是否*溶解,如未溶解,可以70℃-90℃加熱,并振蕩以促進溶解。
MDA提取:
1、細菌、細胞或組織樣品的制備:
細菌或培養細胞:先收集細菌或細胞到離心管內,離心后棄上清;按照細菌或細胞數量(104個):提取液體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬細菌或細胞加入1mL提取液),超聲波破碎細菌或細胞(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復30次);8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。
組織:按照組織質量(g):提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液),進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。
2、血清(漿)樣品:直接檢測。
測定步驟:
1、吸取0.6mL 試劑一于1.5mL離心管中,再加入0.2mL樣本, 混勻。
2、95℃水浴中保溫30min(蓋緊,防止水分散失),置于冰浴中冷卻,10000g,25℃,離心10min。
3、吸取上清液于1mL玻璃比色皿中,測定532nm和600nm處的吸光度,記為A532和A600,ΔA= A532-A600。