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產品名稱 | 組織來源 | 肺動脈組織 | |
規格 | 5×10?Cells/T25培養瓶 | 包裝 | T25培養瓶 |
貨號 | GOY-01X0685 | 細胞形態 | 成纖維細胞樣 |
人肺大動脈平滑肌分離自肺大動脈組織；肺大動脈亦稱肺動脈干。在呼吸空氣的脊椎動物中，把靜脈血由心臟導向肺臟的動脈。肺大動脈起于右心室，在主動脈之前向左上后方斜行，在主動脈弓下方分為左、右肺動脈，經肺門入肺。肺動脈干位于心包內，為一粗短的動脈干。起自右心室，在升主動脈前方向左后上方斜行，至主動脈弓下方分為左、右肺動脈。左肺動脈較短，在左主支氣管前方橫行，分二支進入左肺上、下葉。右肺動脈較長而粗，經升主動脈和上腔靜脈后方向右橫行，至右肺門處分為三支進入右肺上、中、下葉。肺大動脈平滑肌細胞是肺血管的重要結構細胞之一，在調控肺血管的收縮和舒張功能中有重要作用。肺大動脈平滑肌細胞原代分離培養3天后，可見細胞貼壁伸展，細胞形態大小不一，呈梭形、不規則形、三角形或扇形，核卵圓形、居中；2周后細胞匯合，多數細胞伸展呈長梭形，胞漿豐富，有分枝狀突起，細胞平行排列成單層或部分區域多層重疊生長，高低起伏；細胞密度低時，常交織成網狀；密度高時，則排列為旋渦狀或柵欄狀。傳代后細胞生長較快，4-6天即可匯合，并保持上述形態學特征和生長特點。肺大動脈平滑肌細胞的異常是肺動脈高壓發生發展的重要病理學特征，其凋亡和增殖失衡是肺血管重塑的關鍵。研究表明，急性和慢性缺氧均可導致肺動脈高壓，即缺氧性肺動脈高壓，推斷缺氧可能是通過促進肺大動脈平滑肌細胞的增殖而參與缺氧性肺動脈高壓的發生發展。肺大動脈平滑肌細胞主要功能：①細胞表面表達介質（ICAM-1和VCAM-1）參與血管壁炎癥反應；②是多數重要動脈疾病的靶細胞。肺大動脈平滑肌細胞與主要病生理變化：①平滑肌增生易致肺動脈高壓；②先天性肺動脈狹窄；③肺動脈栓塞。
方法簡介：
公司實驗室分離的人肺大動脈平滑肌采用yi蛋白酶-膠原酶聯合消化法結合差速貼壁法制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。
質量檢測：
公司實驗室分離的人肺大動脈平滑肌經α-SMA免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。
培養基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長特性 貼壁
細胞形態 成纖維細胞樣
傳代特性 可傳5代左右；3代以內狀態
消化液 0.25%yi蛋白酶
培養條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%
準備工作
1. 實驗器材準備：準備無菌的培養皿、培養瓶、移液管、離心管、手術器械等，并進行高壓滅菌或其他合適的消毒處理。
2. 試劑準備：配制或購買合適的培養基、消化酶（如、膠原酶等）、胎牛血清、雙抗等試劑，確保其無菌且在有效期內。
3. 實驗動物或組織來源準備：根據實驗需求，選擇合適的動物并進行相應的麻醉或處死，獲取所需組織；或從已有的組織樣本庫中獲取組織。
取材與處理
1. 取材：在無菌條件下，迅速取出目標組織，盡量減少對組織的損傷，并去除多余的脂肪、結締組織等非目的組織。
2. 清洗：將取出的組織用預冷的無菌PBS沖洗數次，以去除血液和雜質。
3. 剪切：將組織剪成約1 - 2mm3的小塊，以便后續消化。
細胞分離
1. 消化：將剪碎的組織塊放入含有適量消化酶的離心管中，在37℃恒溫搖床或培養箱中消化一段時間。期間可輕輕搖晃離心管，使消化更均勻。
2. 終止消化：當組織塊大部分被消化成單細胞懸液或小細胞團時，加入含血清的培養基終止消化。
3. 過濾與離心：用細胞篩過濾細胞懸液，去除未消化的組織碎片，然后將濾液以適當的轉速離心，收集細胞沉淀。
細胞觀察與檢測
1. 日常觀察：每天用倒置顯微鏡觀察細胞的形態、生長狀態、密度等，記錄細胞的變化情況，如發現細胞污染或異常，及時采取相應措施。
2. 細胞計數與活力檢測：在需要時，可采用臺盼藍染色等方法對細胞進行計數和活力檢測，以了解細胞的生長情況和健康狀態。
大鼠視網膜前體細胞 | 大鼠視網膜色上皮細胞 |
大鼠視網膜神經節細胞 | 抗腫瘤化合物庫（詢價） |
大鼠視網膜微血管內皮細胞 | 亞根溶液標準物質 |
大鼠視網膜微血管周細胞 | 牛膽酸鈉 |
大鼠視網膜小膠質細胞 | 根溶液標準物質 |
大鼠室管膜細胞 | 胰蛋白胨大豆瓊脂（TSA） |
大鼠輸卵管平滑肌細胞 | 西班牙瓊脂糖 Biowest |
人類淋巴母細胞瘤細胞 | Hoechst 33342 熒光染料 |
大鼠輸尿管成纖維細胞 | 抗阿爾茨海默病化合物庫（詢價） |
大鼠輸尿管平滑肌細胞 | 自噬化合物庫（詢價） |
大鼠輸尿管上皮細胞 | Hoechst 33258 熒光染料 |
大鼠髓核細胞 | 沙氏瓊脂培養基 （SDA） |
大鼠胎盤間充質干細胞 | 人肺大動脈平滑肌細胞吡啰紅G 派洛寧G(Y) |
大鼠胎盤絨毛膜滋養層細胞 | SS瓊脂 |
孟加拉紅培養基 | 高鹽察氏培養基 |
一、取材與分離
1. 快速操作
- 組織取材后需立即處理，避免長時間暴露于室溫或非營養環境。
- 使用無菌 PBS 或生理鹽水沖洗組織，去除血液、雜質。
2. 消化酶選擇
- 根據組織類型選擇消化酶，避免過度消化導致細胞損傷。
- 消化時間需嚴格控制（通常 10-30 分鐘），可通過顯微鏡觀察細胞解離狀態。
二、培養條件優化
1. 培養基選擇
- 使用含血清或特定生長因子的培養基（如 DMEM、RPMI 1640 等），部分細胞需添加胰島素、EGF 等。
- 避免頻繁更換培養基品牌或批次，減少細胞適應壓力。
2. 貼壁與傳代
- 原代細胞貼壁能力較弱，可能需要包被培養皿（如膠原蛋白、多聚賴氨酸）。
- 傳代時密度建議控制在 70%-80%，過度匯合會導致接觸抑制和分化。
三、污染控制
1. 無菌操作
- 全程在超凈臺操作，使用一次性耗材，避免交叉污染。
- 培養基中可添加雙抗，但長期使用可能影響細胞活性。
2. 支原體檢測
- 定期檢測支原體污染（如 PCR 法），污染后需及時丟棄細胞。
四、狀態監控
1. 日常觀察
- 每天檢查細胞形態、密度及培養基顏色，及時更換培養基（通常每 2-3 天換液一次）。
- 異常形態（如細胞變圓、碎片增多）可能提示污染或營養不足。
2. 傳代與凍存
- 原代細胞分裂次數有限（一般 5-10 代），需及時凍存早期代次細胞。
- 凍存液建議使用 DMSO+血清（或專用凍存培養基），梯度降溫后液氮保存。
