本公司所有產(chǎn)品僅供科學(xué)實(shí)驗(yàn)，不做其他科學(xué)實(shí)驗(yàn)外的使用！
產(chǎn)品名稱 | 組織來源 | 腎組織 | |
規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 包裝 | T25培養(yǎng)瓶 |
貨號 | GOY-01X0916 | 細(xì)胞形態(tài) | 內(nèi)皮細(xì)胞樣 |
人腎小球內(nèi)皮分離自腎組織；腎臟是機(jī)體的重要器官，它的基本功能是生成尿液，借以清除體內(nèi)代謝產(chǎn)物及某些廢物、毒物，同時經(jīng)重吸收功能保留水份及其他有用物質(zhì)，如葡萄糖、蛋白質(zhì)、氨基酸、鈉離子、鉀離子、碳suan氫鈉等，以調(diào)節(jié)水、電解質(zhì)平衡及維護(hù)酸堿平衡。腎臟同時還有內(nèi)分泌功能，生成腎素、促紅細(xì)胞生成素、活性維生D3、前列腺素、激肽等，又為機(jī)體部分內(nèi)分泌激素的降解場所和腎外激素的靶器官。腎臟的這些功能，保證了機(jī)體內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定，使新陳代謝得以正常進(jìn)行。腎小球是腎元中的用于將血液過濾生成原尿的一團(tuán)毛細(xì)血叢，被鮑氏囊所包裹，是尿液形成的重要構(gòu)造。血液經(jīng)由入球小動脈進(jìn)入腎小球。腎小球內(nèi)的微血管不像其他微血管，匯流入靜脈，而是流入出球小動脈。在腎小球內(nèi)，微血管受到高壓，而加速了超濾作用（hyperfiltration）的進(jìn)行。微血管中的血液經(jīng)由超濾作用之后，形成濾液，滲入鮑氏囊內(nèi)。腎小球與鮑氏囊合稱為腎小體，腎小球的過濾速率便稱為腎小球過濾率。腎小球內(nèi)皮細(xì)胞是一類特殊微血管類型的細(xì)胞。細(xì)胞為圓形、多角形，單層貼壁生長；細(xì)胞質(zhì)豐富，細(xì)胞核為圓形或卵圓形。腎小球內(nèi)皮細(xì)胞被覆于腎小球毛細(xì)血管壁腔側(cè)，與血流直接接觸，是腎小球?yàn)V過膜的道屏障，可粘附細(xì)菌和白細(xì)胞，修復(fù)基底膜，并有抗凝、抗血栓的作用；所以，體外培養(yǎng)的腎小球內(nèi)皮細(xì)胞在免疫學(xué)和病理生理學(xué)領(lǐng)域中具有重要的研究價值。
方法簡介：
公司實(shí)驗(yàn)室分離的人腎小球內(nèi)皮采用先機(jī)械研磨過不銹鋼網(wǎng)篩分離得到腎小球、后用膠原酶消化，結(jié)合內(nèi)皮細(xì)胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測：
公司實(shí)驗(yàn)室分離的人腎小球內(nèi)皮經(jīng)CD31免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
包被條件 PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%）
培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長特性 貼壁
細(xì)胞形態(tài) 內(nèi)皮細(xì)胞樣
傳代特性 可傳2-3代
消化液 0.25%yi蛋白酶
培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%
準(zhǔn)備工作
1. 實(shí)驗(yàn)器材準(zhǔn)備：準(zhǔn)備無菌的培養(yǎng)皿、培養(yǎng)瓶、移液管、離心管、手術(shù)器械等，并進(jìn)行高壓滅菌或其他合適的消毒處理。
2. 試劑準(zhǔn)備：配制或購買合適的培養(yǎng)基、消化酶（如、膠原酶等）、胎牛血清、雙抗等試劑，確保其無菌且在有效期內(nèi)。
3. 實(shí)驗(yàn)動物或組織來源準(zhǔn)備：根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求，選擇合適的動物并進(jìn)行相應(yīng)的麻醉或處死，獲取所需組織；或從已有的組織樣本庫中獲取組織。
取材與處理
1. 取材：在無菌條件下，迅速取出目標(biāo)組織，盡量減少對組織的損傷，并去除多余的脂肪、結(jié)締組織等非目的組織。
2. 清洗：將取出的組織用預(yù)冷的無菌PBS沖洗數(shù)次，以去除血液和雜質(zhì)。
3. 剪切：將組織剪成約1 - 2mm3的小塊，以便后續(xù)消化。
細(xì)胞分離
1. 消化：將剪碎的組織塊放入含有適量消化酶的離心管中，在37℃恒溫?fù)u床或培養(yǎng)箱中消化一段時間。期間可輕輕搖晃離心管，使消化更均勻。
2. 終止消化：當(dāng)組織塊大部分被消化成單細(xì)胞懸液或小細(xì)胞團(tuán)時，加入含血清的培養(yǎng)基終止消化。
3. 過濾與離心：用細(xì)胞篩過濾細(xì)胞懸液，去除未消化的組織碎片，然后將濾液以適當(dāng)?shù)霓D(zhuǎn)速離心，收集細(xì)胞沉淀。
細(xì)胞觀察與檢測
1. 日常觀察：每天用倒置顯微鏡觀察細(xì)胞的形態(tài)、生長狀態(tài)、密度等，記錄細(xì)胞的變化情況，如發(fā)現(xiàn)細(xì)胞污染或異常，及時采取相應(yīng)措施。
2. 細(xì)胞計(jì)數(shù)與活力檢測：在需要時，可采用臺盼藍(lán)染色等方法對細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)和活力檢測，以了解細(xì)胞的生長情況和健康狀態(tài)。
人胚胎腸粘膜來源細(xì)胞 | 人乳腺轉(zhuǎn)移性小葉癌細(xì)胞 |
小鼠視網(wǎng)膜內(nèi)皮細(xì)胞 | 干細(xì)胞無血清培養(yǎng)基 |
大鼠回腸細(xì)胞 | 干細(xì)胞無酚紅培養(yǎng)基 |
人脊索瘤細(xì)胞 | 淋巴細(xì)胞培養(yǎng)基 |
大鼠肝癌細(xì)胞（wistar大鼠） | 免疫細(xì)胞無血清培養(yǎng)基 |
雞肝癌細(xì)胞 | 骨髓細(xì)胞培養(yǎng)基 |
人氣管平滑肌細(xì)胞 | 新生牛血清（定制） |
HL 60（hl-60）人早幼粒白血病細(xì)胞 | 甘肽-瓊脂糖凝膠H.P. |
倉鼠beta胰島細(xì)胞 | Recombinant GFP 重組綠色熒光蛋白 |
人高轉(zhuǎn)移性乳腺癌細(xì)胞 | Recombinant RFP 重組紅色熒光蛋白 |
人永生化支氣管上皮細(xì)胞 | 甘肽-瓊脂糖凝膠4FF |
人慢性淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞 | 肝-瓊脂糖凝膠H.P. |
人支氣管上皮樣細(xì)胞 | 人腎小球內(nèi)皮細(xì)胞肝-瓊脂糖凝膠6FF |
人低轉(zhuǎn)移前列腺癌細(xì)胞 | 藍(lán)色瓊脂糖凝膠Cl-6B |
三號膽鹽 | 脂多糖（普通變形桿菌） |
一、取材與分離
1. 快速操作
- 組織取材后需立即處理，避免長時間暴露于室溫或非營養(yǎng)環(huán)境。
- 使用無菌 PBS 或生理鹽水沖洗組織，去除血液、雜質(zhì)。
2. 消化酶選擇
- 根據(jù)組織類型選擇消化酶，避免過度消化導(dǎo)致細(xì)胞損傷。
- 消化時間需嚴(yán)格控制（通常 10-30 分鐘），可通過顯微鏡觀察細(xì)胞解離狀態(tài)。
二、培養(yǎng)條件優(yōu)化
1. 培養(yǎng)基選擇
- 使用含血清或特定生長因子的培養(yǎng)基（如 DMEM、RPMI 1640 等），部分細(xì)胞需添加胰島素、EGF 等。
- 避免頻繁更換培養(yǎng)基品牌或批次，減少細(xì)胞適應(yīng)壓力。
2. 貼壁與傳代
- 原代細(xì)胞貼壁能力較弱，可能需要包被培養(yǎng)皿（如膠原蛋白、多聚賴氨酸）。
- 傳代時密度建議控制在 70%-80%，過度匯合會導(dǎo)致接觸抑制和分化。
三、污染控制
1. 無菌操作
- 全程在超凈臺操作，使用一次性耗材，避免交叉污染。
- 培養(yǎng)基中可添加雙抗，但長期使用可能影響細(xì)胞活性。
2. 支原體檢測
- 定期檢測支原體污染（如 PCR 法），污染后需及時丟棄細(xì)胞。
四、狀態(tài)監(jiān)控
1. 日常觀察
- 每天檢查細(xì)胞形態(tài)、密度及培養(yǎng)基顏色，及時更換培養(yǎng)基（通常每 2-3 天換液一次）。
- 異常形態(tài)（如細(xì)胞變圓、碎片增多）可能提示污染或營養(yǎng)不足。
2. 傳代與凍存
- 原代細(xì)胞分裂次數(shù)有限（一般 5-10 代），需及時凍存早期代次細(xì)胞。
- 凍存液建議使用 DMSO+血清（或?qū)Ｓ脙龃媾囵B(yǎng)基），梯度降溫后液氮保存。
