使用方法:
一、樣品 RNA 的制備
、用自選方法抽提病毒樣品 RNA。注意:可以選用本公司的一管式病毒 RNAout
2、或柱式病毒 RNAout。
二:RT(逆轉錄)反應合成 cDNA
. 按下表配制 RT 反應體系(20 μL 體系)
2. 70℃保溫 5 分鐘變性模板后立即冰浴。
3. 嚴格按順序加入 6μL RT Buffer(含 dNTP)和 2μL MMLV 逆轉錄酶(含 RI),
反應終體積為 20μL。
4. 42℃保溫 60 分鐘。此步為 RT 反應。
5. 70℃保溫 0 分鐘以終止反應,然后放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以直接作為 PCR 模板使用,丌需要純化。
?產品名稱:產色葡萄球菌PCR檢測試劑盒價格
英文名稱:Staphylococcus chromogenesPCR
規(guī)格:詳見說明書
類別:PCR檢測試劑盒
運輸:低溫、避光、快遞免費送貨上門。
用途:生化實驗,合成實驗等試驗。
運輸及保存:低溫運輸,-20℃保存, 保存期限為 6 個月。
自備試劑:樣品 RNA。
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性能指標:點擊了解更多PCR檢測試劑盒。
.試劑盒檢測特異性為00%
2. 檢測試劑盒重現(xiàn)性為00%
3. 靈敏度可達到03/ml
4. 有效期為6個月
注意事項:
①加入試劑的順序應*,以保證所有反應板孔溫育的時間一樣。
②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。
③按照雞血紅蛋白(HB)ELISA檢測試劑盒說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。
④底物A應揮發(fā),避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實驗完成后應立即讀取OD值。
⑤洗滌酶標板時應充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。
⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時,避免使用帶金屬部分的加樣器 。
⑦實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質。
⑧試劑應按標簽說明書儲存,使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄,不可保存。
⑨不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質前使用。
反應五要素:
參加PCR反應的物質主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應的關鍵,PCR 產物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設計互補的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設計引物應遵循以下原則:
①引物長度: 5-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴增長至0kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC隨機分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內部出現(xiàn)二級結構,避免兩條引物間互補,特別是3'端的互補,否則會形成引物二聚體,產生非特異的擴增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是末及倒數(shù)第二個堿基,應嚴格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點, 被擴增的靶序列有適宜的酶切位點, 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.~umol或0~00pmol,以低引物量產生所需要的結果為好,引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增,且可增加引物之間形成二聚體的機會。
?pRSV-rev英文名(EN):,,3,3-Tetramethyldisiloxane,≥98.0%CAS No.:3277-26-7規(guī)格(SP):25G類別(Key):通用試劑
pSC94英文名(EN):,,3,3-Tetramethyldisilazane,≥98.0%CAS No.:5933-59-2規(guī)格(SP):0G類別(Key):通用試劑
pSE380英文名(EN):Tetrakis(trimethylsilyl)silane,≥97.0%CAS No.:4098-98-0規(guī)格(SP):G類別(Key):通用試劑
pSE934英文名(EN):,2-Diiodotetrafluoroethane,≥98.0%CAS No.:354-65-4規(guī)格(SP):G類別(Key):通用試劑
pSecTag 2A英文名(EN):Tetraethylsilane,≥95.0%CAS No.:63-36-7規(guī)格(SP):5ML類別(Key):通用試劑
pBAD24英文名(EN):Tetracontane,≥95.0%CAS No.:48-95-7規(guī)格(SP):500MG類別(Key):通用試劑
pSecTag B英文名(EN):Benzo-,4-dioxane,≥97.0%CAS No.:493-09-4規(guī)格(SP):0G類別(Key):通用試劑
pSecTag2/Hygro A英文名(EN):,4,8,-Tetraazacyclotetradecane,98%CAS No.:295-37-4規(guī)格(SP):G類別(Key):通用試劑
pSEP英文名(EN):Glyoxal bis(diallyl acetal) ,85%CAS No.:6646-44-9規(guī)格(SP):50G類別(Key):通用試劑
pSEP2英文名(EN):3-Glycidyloxypropyltrimethoxysilane,≥...CAS No.:2530-83-8規(guī)格(SP):00ML類別(Key):通用試劑
pSEP3英文名(EN):3-Chloropropyltriethoxysilane,95%CAS No.:5089-70-3規(guī)格(SP):00ML類別(Key):通用試劑
pSET52英文名(EN):3-(2-Aminoethylamino)propyldimethoxyme...CAS No.:3069-29-2規(guī)格(SP):0ML類別(Key):通用試劑
pSFV英文名(EN):n-Propyltriethoxysilane,≥98%CAS No.:237449規(guī)格(SP):25G類別(Key):通用試劑
pSG54英文名(EN):N-[3-(Trimethoxysilyl)propyl]ethylened...CAS No.:760-24-3規(guī)格(SP):00ML類別(Key):通用試劑
pSH47英文名(EN):3-Aminopropyl(diethoxy)methylsilane,97%CAS No.:379-76-8規(guī)格(SP):50ML類別(Key):通用試劑
pSH63英文名(EN):Bis(diphenylphosphino)methane,≥97%CAS No.:207-20-7規(guī)格(SP):G類別(Key):通用試劑
pSH65英文名(EN):,2-Bis(dimethylphosphino)ethane,97%CAS No.:23936-60-9規(guī)格(SP):250MG類別(Key):通用試劑
pShooter英文名(EN):,2-Bis(diphenylphosphino)ethane,99%CAS No.:663-45-2規(guī)格(SP):G類別(Key):通用試劑
產色葡萄球菌PCR檢測試劑盒價格DL- 規(guī)格:20mg Scopoletin
FMOC-L- 規(guī)格:00mg Nitrofurfural Diacetate
CBZ-D- 規(guī)格:2ml×2amplues Dicyclohexyl
L-甲酯鹽酸鹽 規(guī)格:200mg Iodixanol
L-二甲酯酸鹽 規(guī)格:300mg Pilocarpine
L-二甲酯鹽酸鹽 規(guī)格:250mg Fosphenytoin Sodium
L-二乙酯鹽酸鹽 規(guī)格:0.2ml
L-異甲酯鹽酸鹽 規(guī)格:5mg
L-甲酯鹽酸鹽 規(guī)格:200mg Cefdinir
L-賴氨酸甲酯鹽酸鹽 規(guī)格:.5g Powdered Chaste Tree Extract
L-賴氨酸乙酯酸鹽 規(guī)格:50mg
L-苯甲酯鹽酸鹽 規(guī)格:200mg Naphthalene
L-苯乙酯鹽酸鹽 規(guī)格:0mg
L-苯甲酯鹽酸鹽 規(guī)格:500mg Mandelic Acid (AS)
L-苯乙酯鹽酸鹽 規(guī)格:400mg Sodium Starch Glycolate Type A