犬游離脂肪酸(FFA)ELISA試劑盒

英文名：Dog FFA (FFA) ELISA Kit

規(guī)    格  ：96T/48T

保存條件：2-8℃   

產(chǎn)  地  ：國(guó)產(chǎn)/進(jìn)口

elisa試劑盒操作步驟

1.標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋與加樣：在酶標(biāo)包被板上設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品孔10孔，在*、第二孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品100μl，然后在*、第二孔中加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl，混勻;然后從*孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl，混勻;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉，再各取50μl分別加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50ul，混勻;混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl，混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl，混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。(稀釋后各孔加樣量都為50μl，濃度分別為1200pg/ml，800pg/ml ，400pg/ml，200pg/ml，100pg/ml)。

2. 加樣：分別設(shè)空白孔(空白比照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其他各步操作相同)、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測(cè)樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不涉及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。

3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。

4. 配液：將30(48T的20倍)倍濃縮洗滌液用蒸餾水30(48T的20倍)倍稀釋后備用。

5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。

6. 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外。

7. 溫育：操作同3。

8. 洗滌：操作同5。

9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.

10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。

11. 測(cè)定：以空白空調(diào)零，450nm波長(zhǎng)依序丈量各孔的吸光度(OD值)。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。

注意事項(xiàng)：

1）在收集標(biāo)本前都必須有一個(gè)完整的計(jì)劃，必須清楚要檢測(cè)的成份是否足夠穩(wěn)定。

2）我們提倡新鮮標(biāo)本盡早檢測(cè)，對(duì)收集后及時(shí)進(jìn)行檢測(cè)。1-3天左右檢測(cè)的樣本可儲(chǔ)存在4℃備用。如有特殊原因需要周期性收集標(biāo)本，請(qǐng)將標(biāo)本及時(shí)分裝后放在-20℃或- 70℃條件下保存，避免反復(fù)凍融。

液體類標(biāo)本：

包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清等。

1）血清：

室溫血液自然凝固10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。

2）血漿：

應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。

3）尿液：

用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實(shí)行。

4）細(xì)胞培養(yǎng)上清：

A、檢測(cè)分泌性的成份時(shí)，用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/ 分）。仔細(xì)收集上清。

B、檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí)，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細(xì)胞懸液，細(xì)胞濃度達(dá)到100萬(wàn)/ml左右。通過(guò)反復(fù)凍融，以使細(xì)胞破壞并 放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。

5）組織標(biāo)本：

切割標(biāo)本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆谩?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測(cè)，其余冷凍備用。

植物葉片的處理方法：

新鮮葉片加PBS研磨，離心，取上清，PBS濃度為0.01mol，PH值是7.4，轉(zhuǎn)速2500-3500轉(zhuǎn)，10分鐘左右
葉片采好放在2-8度就可以了，可以放置一周。處理好了再放到-20保存。取一克樣本，用5mlPBS勻漿取上清，PBS為0.01M，pH為7.4的

基本操作就是取糞便500ug-1g加入2-5ml的PBS，充分勻漿（百分之20）
PBS的PH值是：7.4  PBS濃度是0.01mol

糞便

基本操作就是取糞便500ug-1g加入2-5ml的PBS，充分勻漿（百分之20）
PBS的PH值是：7.4  PBS濃度是0.01mol
take Feces 500ug-1g，add PBS 2-5ml(PH7.4  0.01mol),Homogenized by hand or Grinders(20%)

-80度保存保存半年沒(méi)有問(wèn)題。

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