本公司所有產(chǎn)品僅供科學(xué)實(shí)驗(yàn)，不做其他科學(xué)實(shí)驗(yàn)外的使用！
產(chǎn)品名稱 | 組織來(lái)源 | 肺組織 | |
規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 包裝 | T25培養(yǎng)瓶 |
貨號(hào) | GOY-01X0730 | 細(xì)胞形態(tài) | 成纖維細(xì)胞樣 |
人肺成纖維分離自肺組織；肺是機(jī)體的呼吸器官，位于胸腔，左右各一，覆蓋于心之上。肺有分葉，左二右三，共五葉。肺經(jīng)肺系（指氣管、支氣管等）與喉、鼻相連，故稱喉為肺之門戶，鼻為肺之外竅。成纖維細(xì)胞（Fibroblast）是疏松結(jié)締組織的主要細(xì)胞成分，由胚胎時(shí)期的間充質(zhì)細(xì)胞分化而來(lái)；成纖維細(xì)胞較大，輪廓清楚，多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結(jié)構(gòu)，其細(xì)胞核呈規(guī)則的卵圓形，核仁大而明顯。成纖維細(xì)胞功能活動(dòng)旺盛，細(xì)胞質(zhì)嗜弱堿性，具明顯的蛋白質(zhì)合成和分泌活動(dòng)，在一定條件下，它可以實(shí)現(xiàn)跟纖維細(xì)胞的互相轉(zhuǎn)化；成纖維細(xì)胞對(duì)不同程度的細(xì)胞變性、壞死和組織缺損的修復(fù)有著十分重要的作用。剛分離的肺成纖維細(xì)胞呈圓形、折光性良好，懸浮于培養(yǎng)基中。30min細(xì)胞貼壁，其中部分開(kāi)始伸出偽足，表現(xiàn)為小的突起；6h后細(xì)胞基本貼壁wan全，伸展成梭形，胞核清晰，分布較均勻，散在生長(zhǎng)，不聚集成團(tuán)；細(xì)胞生長(zhǎng)迅速，5-7天即呈融合狀態(tài)，細(xì)胞排列緊密，有的交叉重疊生長(zhǎng)，平坦、胞體較大，細(xì)胞質(zhì)透明，細(xì)胞核較大，呈橢圓形，顏色淡。細(xì)胞融合，并彼此連接成網(wǎng)狀；細(xì)胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布。肺成纖維細(xì)胞在生理?xiàng)l件下的主要功能包括：構(gòu)造和維持肺器官的正常形態(tài)，合成和釋放細(xì)胞外基質(zhì)以及組織損傷后及時(shí)大量聚集修復(fù)損傷組織。
方法簡(jiǎn)介：
公司實(shí)驗(yàn)室分離的人肺成纖維采用yi蛋白酶-膠原酶混合消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來(lái)，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測(cè)：
公司實(shí)驗(yàn)室分離的人肺成纖維經(jīng)Vimentin免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
培養(yǎng)基 含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長(zhǎng)特性 貼壁
細(xì)胞形態(tài) 成纖維細(xì)胞樣
傳代特性 可傳5代左右；3代以內(nèi)狀態(tài)
消化液 0.25%yi蛋白酶
培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%
準(zhǔn)備工作
1. 實(shí)驗(yàn)器材準(zhǔn)備：準(zhǔn)備無(wú)菌的培養(yǎng)皿、培養(yǎng)瓶、移液管、離心管、手術(shù)器械等，并進(jìn)行高壓滅菌或其他合適的消毒處理。
2. 試劑準(zhǔn)備：配制或購(gòu)買合適的培養(yǎng)基、消化酶（如、膠原酶等）、胎牛血清、雙抗等試劑，確保其無(wú)菌且在有效期內(nèi)。
3. 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物或組織來(lái)源準(zhǔn)備：根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求，選擇合適的動(dòng)物并進(jìn)行相應(yīng)的麻醉或處死，獲取所需組織；或從已有的組織樣本庫(kù)中獲取組織。
取材與處理
1. 取材：在無(wú)菌條件下，迅速取出目標(biāo)組織，盡量減少對(duì)組織的損傷，并去除多余的脂肪、結(jié)締組織等非目的組織。
2. 清洗：將取出的組織用預(yù)冷的無(wú)菌PBS沖洗數(shù)次，以去除血液和雜質(zhì)。
3. 剪切：將組織剪成約1 - 2mm3的小塊，以便后續(xù)消化。
細(xì)胞分離
1. 消化：將剪碎的組織塊放入含有適量消化酶的離心管中，在37℃恒溫?fù)u床或培養(yǎng)箱中消化一段時(shí)間。期間可輕輕搖晃離心管，使消化更均勻。
2. 終止消化：當(dāng)組織塊大部分被消化成單細(xì)胞懸液或小細(xì)胞團(tuán)時(shí)，加入含血清的培養(yǎng)基終止消化。
3. 過(guò)濾與離心：用細(xì)胞篩過(guò)濾細(xì)胞懸液，去除未消化的組織碎片，然后將濾液以適當(dāng)?shù)霓D(zhuǎn)速離心，收集細(xì)胞沉淀。
細(xì)胞觀察與檢測(cè)
1. 日常觀察：每天用倒置顯微鏡觀察細(xì)胞的形態(tài)、生長(zhǎng)狀態(tài)、密度等，記錄細(xì)胞的變化情況，如發(fā)現(xiàn)細(xì)胞污染或異常，及時(shí)采取相應(yīng)措施。
2. 細(xì)胞計(jì)數(shù)與活力檢測(cè)：在需要時(shí)，可采用臺(tái)盼藍(lán)染色等方法對(duì)細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)和活力檢測(cè)，以了解細(xì)胞的生長(zhǎng)情況和健康狀態(tài)。
大鼠腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤細(xì)胞(低分化) | 小鼠骨髓瘤細(xì)胞 |
人表皮癌細(xì)胞 | 巖藻糖 |
小鼠睪丸間質(zhì)細(xì)胞瘤細(xì)胞 | 聚蔗糖 Ficoll 400 |
人惡性黑色瘤細(xì)胞（2013年新引進(jìn)）（干細(xì)胞庫(kù)保藏） | 反丁烯二酸 |
人惡性多發(fā)性畸胎瘤細(xì)胞 | 2×HEPES(pH7.2- 7.4) |
人腎細(xì)胞腺癌細(xì)胞 | 嗎啉乙磺酸 |
人結(jié)腸腺癌肺轉(zhuǎn)移細(xì)胞 | 間硝基苯甲酸 |
人外周血慢性髓性白血病細(xì)胞；KU812E | 5-溴嘧啶 |
大鼠腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞 | 2-脫氧-D-核糖 |
人原位胰腺腺癌細(xì)胞 | 優(yōu)級(jí)胎牛血清(無(wú)噬菌體低內(nèi)毒素) |
人肺鱗癌細(xì)胞 | 硫酸葡聚糖 |
大鼠腹水癌細(xì)胞 | D-棉子糖 |
人膀胱移行細(xì)胞癌細(xì)胞 | 人肺成纖維細(xì)胞6-磷酸果糖二鈉 |
人T淋巴瘤細(xì)胞 | 羧甲基纖維素鈉 CMC（粘度800-1200） |
大豆分離蛋白 | β-環(huán)糊精 進(jìn)口 |
一、取材與分離
1. 快速操作
- 組織取材后需立即處理，避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于室溫或非營(yíng)養(yǎng)環(huán)境。
- 使用無(wú)菌 PBS 或生理鹽水沖洗組織，去除血液、雜質(zhì)。
2. 消化酶選擇
- 根據(jù)組織類型選擇消化酶，避免過(guò)度消化導(dǎo)致細(xì)胞損傷。
- 消化時(shí)間需嚴(yán)格控制（通常 10-30 分鐘），可通過(guò)顯微鏡觀察細(xì)胞解離狀態(tài)。
二、培養(yǎng)條件優(yōu)化
1. 培養(yǎng)基選擇
- 使用含血清或特定生長(zhǎng)因子的培養(yǎng)基（如 DMEM、RPMI 1640 等），部分細(xì)胞需添加胰島素、EGF 等。
- 避免頻繁更換培養(yǎng)基品牌或批次，減少細(xì)胞適應(yīng)壓力。
2. 貼壁與傳代
- 原代細(xì)胞貼壁能力較弱，可能需要包被培養(yǎng)皿（如膠原蛋白、多聚賴氨酸）。
- 傳代時(shí)密度建議控制在 70%-80%，過(guò)度匯合會(huì)導(dǎo)致接觸抑制和分化。
三、污染控制
1. 無(wú)菌操作
- 全程在超凈臺(tái)操作，使用一次性耗材，避免交叉污染。
- 培養(yǎng)基中可添加雙抗，但長(zhǎng)期使用可能影響細(xì)胞活性。
2. 支原體檢測(cè)
- 定期檢測(cè)支原體污染（如 PCR 法），污染后需及時(shí)丟棄細(xì)胞。
四、狀態(tài)監(jiān)控
1. 日常觀察
- 每天檢查細(xì)胞形態(tài)、密度及培養(yǎng)基顏色，及時(shí)更換培養(yǎng)基（通常每 2-3 天換液一次）。
- 異常形態(tài)（如細(xì)胞變圓、碎片增多）可能提示污染或營(yíng)養(yǎng)不足。
2. 傳代與凍存
- 原代細(xì)胞分裂次數(shù)有限（一般 5-10 代），需及時(shí)凍存早期代次細(xì)胞。
- 凍存液建議使用 DMSO+血清（或?qū)Ｓ脙龃媾囵B(yǎng)基），梯度降溫后液氮保存。
