北京諾博萊德科技有限公司供應(yīng)* NobleRyder D0923；現(xiàn)貨供應(yīng)* NobleRyder D0923量大優(yōu)惠，咨詢 ： 1215878164
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試劑盒組成 | 50T | 200T | 保存溫度 |
RNaseA（10mg/ml） | 500ul | 2ml | -20℃ |
蛋白酶K（10mg/ml） | 500ul | 2ml | -20℃ |
紅細(xì)胞裂解液(10×) | 30ml | 120ml | RT |
裂解液 | 12.5ml | 50ml | RT |
結(jié)合液 | 25ml | 100ml | RT |
玻璃奶 | 2.5 | 10ml | RT |
TE緩沖液 | 10ml | 30ml | RT |
原理簡介
本試劑盒適用于各種動物抗凝全血樣本，用于從中提取基因組DNA。*的裂解緩沖液加上蛋白酶K等迅速去掉除DNA外的其他物質(zhì)，并利用玻璃奶吸附DNA，進(jìn)一步的去掉其他雜質(zhì)，提取出來，得到的DNA可用于PCR/Real time-PCR，sequencing，Southern blot，mutant analysis，SNP 等下游應(yīng)用實驗。
注意事項
1．裂解液低溫時可能出現(xiàn)析出和沉淀，可以在熱水中溫浴幾分鐘幫助重新溶解，恢復(fù)澄清透明后冷卻到室溫即可使用。
2．避免試劑長時間暴露于空氣中產(chǎn)生揮發(fā)、氧化、pH值變化，各溶液使用后應(yīng)及時蓋緊蓋子。
3．RNaseA經(jīng)常使用可放2－8度保存，蛋白酶K請放－20度保存。
4．同一樣本，如果想大量提取，可以增加樣本量，并且每一步試劑加量，但使用次數(shù)會成倍減少。
操作步驟
在合適的容器中，用雙蒸水將紅細(xì)胞裂解液（10×）稀釋成1×。即10ml溶液中加入90ml雙蒸水混勻。
1．取不超過500ul抗凝血，加入三倍體積的稀釋過的紅細(xì)胞裂解液，混勻。放置2分鐘，12000rpm離心1分鐘。去上清。再加入2倍體積的紅細(xì)胞裂解液，用移液器輕輕吹打沉淀，充分混勻，離心，棄上清，沉淀為白細(xì)胞。如果血液為家擒類動物，因為紅細(xì)胞有核，所以可以省去此步，但加入的樣品量不要超過50ul,直接進(jìn)入下一步。
2．加入250ul裂解液，加入10μl RNase A(10mg/ml)溶液，振蕩混勻，室溫放置5-10分鐘。
3．加入10μl蛋白酶K(10mg/ml)溶液，顛倒混勻，65℃放置10－30分鐘，期間顛倒3－5次，小心內(nèi)心管蓋受熱開啟。如30分鐘沉淀無法*消失，請注意第6步處理。
4，在上清中加入三倍體積無水乙醇，充分混勻。
5．12000rpm離心5分鐘，吸去上清，核酸在沉淀中。
6．沉淀中加入500ul結(jié)合液，65℃水浴1-2分鐘，核酸沉淀可溶解（如無法*溶解，可轉(zhuǎn)移上清到一新的離心管中，棄沉淀）。
6．玻璃奶搖勻。加入50ul搖勻的玻璃奶，混勻，室溫放置2分鐘，10000轉(zhuǎn)/分鐘離心1分鐘，去上清；沉淀加入1ml 70%乙醇，振蕩混勻，10000轉(zhuǎn)/分鐘離心1分鐘，去上清，70%乙醇重復(fù)洗一次，再用無水乙醇洗一次。去上清，再次離心2分鐘，用小吸頭吸去上清。
7．室溫放置10分鐘（如果玻璃奶加量，請適當(dāng)延長放置時間，此步為去除殘余酒精，以免影響下游實驗），加入50－100ul TE緩沖液混勻溶解，65℃水浴5分鐘。離心，取上清為所提基因組。
8．電泳或者其他方法檢測，進(jìn)入下游實驗。
北京諾博萊德科技有限公司位于北京市海淀區(qū)，是一家專業(yè)從事生化試劑、分子生物學(xué)試劑、實驗耗材及實驗儀器研發(fā)、銷售、服務(wù)為一體的生物科技公司，公司主要經(jīng)營的進(jìn)口品牌包括Qiagen, Omega, Sigma, Invitrogen, Roche, Abcam, Santa cruz,Fermantas（MBI）, NEB, BD, Peprotech, Abnova, R&D systerms, GE, Biovision, Millipore, Amresco, Merck, CST, Axygen, Corning, NUNC, Thermo fihser, Eppendorf等；產(chǎn)品涉及化工原料、生化試劑、分子克隆相關(guān)試劑、細(xì)胞培養(yǎng)及檢測常用試劑、實驗室常用耗材及儀器。
