HL-60急性粒細胞白血病細胞 上海谷研科技有限公司的原代細胞株及血清,ATCC細胞株、hyclone澳洲特級胎牛血清,優(yōu)等胎牛血清,標準胎牛血清,gibco特優(yōu)級胎牛血清血清,新生牛血清。
細胞術(shù)檢測樣品制備方法
直接標記抗體(FITC標記抗體)HL-60急性粒細胞白血病細胞:
(1) 收集1×106個細胞,800rpm離心5min,4℃以上冷PBS洗一次。
(2) 用4%多聚甲醛1ml室溫固定40分鐘,800rpm離心5min去上清。加2ml PBS重懸洗滌細胞,800rpm離心5min。
(3) 用1ml含5% 人血清的 PBS 重懸細胞,冰上孵育10min,800rpm離心5min去上清。加入200ul含0.5%BSA 和飽和劑量的熒光標記抗體(5×105個細胞/20ul抗體)的PBS ,避光冰上放置30min,離心棄上清。加入200ul 1% 多聚甲醛固定,待測即可。
(4) 用流式細胞儀檢測熒光值,每管計數(shù)10 000個細胞。[2]
未標記抗體間接免疫熒光標記法:
(1)收集2×106個細胞,用冷的PBS 2ml 洗滌細胞一次,800rpm離心5min。
(2)用2ml 4%多聚甲醛室溫固定細胞40min,800rpm離心5min;2ml PBS重懸細胞,800rpm離心5min;
(3)用1ml含0.2%Triton-X100和5%血清的PBS重懸細胞,冰上放置10min,800rpm離心5min。
(4)加入飽和劑量未標記抗體,冰上放置40min,800rpm離心5min,用2ml冷的PBS 重懸細胞,800rpm離心5min,洗去未結(jié)合一抗,重復一次。
(5)加入熒光標記(FITC)標記的二抗,冰上避光放置40min后,800rpm離心5min,去上清,PBS洗滌兩次。
(6)加入0.5ml 1%多聚甲醛重懸細胞;固定待測。
(7)流式細胞儀檢測熒光值,每管計數(shù)10 000個細胞。
細胞周期、細胞凋亡及DNA倍體分析樣品(PI染色)的制備:
(1)待測樣本制成單細胞懸液,然后200g離心5分鐘,棄上清。
(2)用4℃預冷的70%冷乙醇固定,4℃保存 ,至少固定18小時。
(3)調(diào)整細胞濃度為106細胞/毫升,取1毫升細胞懸液,用PBS洗三次,細胞重懸于1毫升PI染液中,37℃孵育30分鐘即可進行流式分析。
(4)PI染液終濃度為50微克/毫升,RNase A終濃度為20微克/毫升。
其他*產(chǎn)品:
porcine heparin * 9041/8/1
HEPTA-4,6-DIENOIC ACID 75283-35-1
GEIPARVARIN 36413-91-9
Gelatins, hydrolyzates,polyMers with urea 9015-56-9
GeldanaMycin 格爾德霉素 30562-34-6
Ferrous glycine sulfate 14729-84-1
Ferruginol FERRUGINOL 514-62-5
Fertirelin Acetate 夫替瑞林 38234-21-8
Fexinidazole 非昔硝唑 59729-37-2
FezolaMine 非唑拉明 80410-36-2
FibrezyM 56367-92-1
Finasteride * 98319-26-7
FingoliMod hydrochloride 鹽酸芬戈莫德 162359-56-0
FIPRONIL 氟蟲腈 120068-37-3
Firocoxib 非羅考昔 189954-96-9
FISETINIDOL-(4A8)-CATECHIN 69127-11-3
FISETINIDOL-(4B8)-CATECHIN 57526-59-7
FITONE 植酮 502-69-2
FlAsH-EDT2 212118-77-9
Flavodilol 黃酮地洛 79619-31-1
Flavopiridol 2-(2-)-5,7-二羥基-8-[(3S,4R)-3-羥基-1-甲基-4-哌啶基]苯并吡喃-4-酮 146426-40-6
Flavoxate 黃酮哌酯 15301-69-6
Flesinoxan 氟辛克生 98206-10-1
細胞凍存
1.將細胞消化下來,移入離心管離心,棄上清
2.準備凍存液比例:50%FBS+40%培養(yǎng)基+10%DMSO(現(xiàn)用現(xiàn)配)
3.加1.5凍存液在離心管中,將細胞吹打均勻,移入凍存管內(nèi).
放入-20度冰箱2-4小時后.再放入-80度冰箱過夜,第二天放入液氮罐保存
原則 慢凍速溶
4.加1.5凍存液在離心管中,將細胞吹打均勻,移入凍存管內(nèi)。
凍存時間。放入4度冰箱10分鐘。再放入-20度冰箱30分鐘-1小時。不能超過1小時。zui后放入-80度冰箱過夜。第二天放入液氮中。
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