PANC-1胰腺癌細胞上海谷研科技有限公司的原代細胞株及血清,ATCC細胞株、hyclone澳洲特級胎牛血清,優(yōu)等胎牛血清,標(biāo)準(zhǔn)胎牛血清,gibco特優(yōu)級胎牛血清血清,新生牛血清。
細胞術(shù)檢測樣品制備方法
直接標(biāo)記抗體(FITC標(biāo)記抗體PANC-1胰腺癌細胞):
(1) 收集1×106個細胞,800rpm離心5min,4℃以上冷PBS洗一次。
(2) 用4%多聚甲醛1ml室溫固定40分鐘,800rpm離心5min去上清。加2ml PBS重懸洗滌細胞,800rpm離心5min。
(3) 用1ml含5% 人血清的 PBS 重懸細胞,冰上孵育10min,800rpm離心5min去上清。加入200ul含0.5%BSA 和飽和劑量的熒光標(biāo)記抗體(5×105個細胞/20ul抗體)的PBS ,避光冰上放置30min,離心棄上清。加入200ul 1% 多聚甲醛固定,待測即可。
(4) 用流式細胞儀檢測熒光值,每管計數(shù)10 000個細胞。[2]
未標(biāo)記抗體間接免疫熒光標(biāo)記法:
(1)收集2×106個細胞,用冷的PBS 2ml 洗滌細胞一次,800rpm離心5min。
(2)用2ml 4%多聚甲醛室溫固定細胞40min,800rpm離心5min;2ml PBS重懸細胞,800rpm離心5min;
(3)用1ml含0.2%Triton-X100和5%血清的PBS重懸細胞,冰上放置10min,800rpm離心5min。
(4)加入飽和劑量未標(biāo)記抗體,冰上放置40min,800rpm離心5min,用2ml冷的PBS 重懸細胞,800rpm離心5min,洗去未結(jié)合一抗,重復(fù)一次。
(5)加入熒光標(biāo)記(FITC)標(biāo)記的二抗,冰上避光放置40min后,800rpm離心5min,去上清,PBS洗滌兩次。
(6)加入0.5ml 1%多聚甲醛重懸細胞;固定待測。
(7)流式細胞儀檢測熒光值,每管計數(shù)10 000個細胞。
細胞周期、細胞凋亡及DNA倍體分析樣品(PI染色)的制備:
(1)待測樣本制成單細胞懸液,然后200g離心5分鐘,棄上清。
(2)用4℃預(yù)冷的70%冷乙醇固定,4℃保存 ,至少固定18小時。
(3)調(diào)整細胞濃度為106細胞/毫升,取1毫升細胞懸液,用PBS洗三次,細胞重懸于1毫升PI染液中,37℃孵育30分鐘即可進行流式分析。
(4)PI染液終濃度為50微克/毫升,RNase A終濃度為20微克/毫升。
其他*產(chǎn)品:
Giripladib 4-(3-[5-氯-1-二苯甲基-2-[2-(((2-三氟甲基芐基)磺酰基)氨基)乙基]-1H-吲哚-3-基]丙基)苯甲酸 865200-20-0
GlatiraMer acetate 醋酸格拉替雷 147245-92-9
Glibornuride 克糖利 26944-48-9
GLIFLUMIDE 格列氟胺 35273-88-2
GLU-ALA-GLU 6234-27-1
GlucoaMylase 淀粉脫脂酶 9032-08-0
Glucose 1-(dihydrogen phosphate) 葡萄糖-1-磷酸 59-56-3
Glucose GlutaMate 葡糖*酯 113114-16-2
GLUTAMATE CAGED 239135-34-3
H-GLU(OBZL)-NCA * 5-芐酯 N-羧基環(huán)內(nèi)酸酐 3190-71-4
L-GLUTAMINE,1kg L-* 56-85-9
Glutaraldehyde sodiuM bisulfite addition coMpound 谷氨醛鈉二硫混合物 7420-89-5
Glutaric acid sodiuM salt 戊二酸二鈉鹽 13521-83-0
Glutathione * 70-18-8
glyceric acid 473-81-4
GLYCERIN ganyou 56-81-5
GLYCERIN, USP, MULTI-COMP, 4 L (5.04 KG)
Tannic acid 單寧酸 1401-55-4
Glycerol forMal ganyou縮甲醛 99569-11-6
Glyceryl Monolaurate ganyou單月桂酸酯 27215-38-9
Glycerol triglycidyl ether 縮水ganyou醚 13236-02-7
細胞凍存
1.將細胞消化下來,移入離心管離心,棄上清
2.準(zhǔn)備凍存液比例:50%FBS+40%培養(yǎng)基+10%DMSO(現(xiàn)用現(xiàn)配)
3.加1.5凍存液在離心管中,將細胞吹打均勻,移入凍存管內(nèi).
放入-20度冰箱2-4小時后.再放入-80度冰箱過夜,第二天放入液氮罐保存
原則 慢凍速溶
4.加1.5凍存液在離心管中,將細胞吹打均勻,移入凍存管內(nèi)。
凍存時間。放入4度冰箱10分鐘。再放入-20度冰箱30分鐘-1小時。不能超過1小時。zui后放入-80度冰箱過夜。第二天放入液氮中。
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