本公司所有產(chǎn)品僅供科學(xué)實(shí)驗(yàn)，不做其他科學(xué)實(shí)驗(yàn)外的使用！
產(chǎn)品名稱 | 大鼠成骨細(xì)胞 | 組織來源 | 顱骨組織 |
規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 包裝 | T25培養(yǎng)瓶 |
貨號 | GOY-01X0996 | 細(xì)胞形態(tài) | 梭形、多角形 |
大鼠成骨分離自顱骨組織；顱骨位于脊柱上方，由23塊形狀和大小不同的扁骨和不規(guī)則骨組成。除下頜骨及舌骨外，其余各骨彼此借縫或軟骨牢固連結(jié)，起著保護(hù)和支持腦、感覺器官以及消化器和呼吸器的起始部分的作用。顱分腦顱和面顱兩部分。腦顱位于顱的后上部，內(nèi)有顱腔，容納腦，共8塊。面顱為顱的前下部分，包含眶、鼻腔、口腔等結(jié)構(gòu)，構(gòu)成面部的支架，共15塊。成骨細(xì)胞是骨形成的主要功能細(xì)胞，負(fù)責(zé)骨基質(zhì)的合成、分泌和礦化。骨不斷地進(jìn)行著重建，骨重建過程包括破骨細(xì)胞貼附在舊骨區(qū)域，分泌酸性物質(zhì)溶解礦物質(zhì)，分泌蛋白酶消化骨基質(zhì)，形成骨吸收陷窩；其后，成骨細(xì)胞移行至被吸收部位，分泌骨基質(zhì)，骨基質(zhì)礦化而形成新骨；破骨與成骨過程的平衡是維持正常骨量的關(guān)鍵。成骨細(xì)胞培養(yǎng)不僅有助于了解骨形成機(jī)制、骨骼系統(tǒng)疾病的分子和細(xì)胞學(xué)基礎(chǔ)，也是藥物篩選、生物材料開發(fā)和生物工程研究的重要手段。
方法簡介：
公司實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠成骨采用先用yi蛋白酶短時(shí)間消化、后用膠原酶反復(fù)消化制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測：
公司實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠成骨經(jīng)ALP染色檢測，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長特性 貼壁
細(xì)胞形態(tài) 梭形、多角形
傳代特性 可傳5代左右；3代以內(nèi)狀態(tài)
消化液 0.25%yi蛋白酶
培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%
準(zhǔn)備工作
1. 實(shí)驗(yàn)器材準(zhǔn)備：準(zhǔn)備無菌的培養(yǎng)皿、培養(yǎng)瓶、移液管、離心管、手術(shù)器械等，并進(jìn)行高壓滅菌或其他合適的消毒處理。
2. 試劑準(zhǔn)備：配制或購買合適的培養(yǎng)基、消化酶（如、膠原酶等）、胎牛血清、雙抗等試劑，確保其無菌且在有效期內(nèi)。
3. 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物或組織來源準(zhǔn)備：根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求，選擇合適的動(dòng)物并進(jìn)行相應(yīng)的麻醉或處死，獲取所需組織；或從已有的組織樣本庫中獲取組織。
取材與處理
1. 取材：在無菌條件下，迅速取出目標(biāo)組織，盡量減少對組織的損傷，并去除多余的脂肪、結(jié)締組織等非目的組織。
2. 清洗：將取出的組織用預(yù)冷的無菌PBS沖洗數(shù)次，以去除血液和雜質(zhì)。
3. 剪切：將組織剪成約1 - 2mm3的小塊，以便后續(xù)消化。
細(xì)胞分離
1. 消化：將剪碎的組織塊放入含有適量消化酶的離心管中，在37℃恒溫?fù)u床或培養(yǎng)箱中消化一段時(shí)間。期間可輕輕搖晃離心管，使消化更均勻。
2. 終止消化：當(dāng)組織塊大部分被消化成單細(xì)胞懸液或小細(xì)胞團(tuán)時(shí)，加入含血清的培養(yǎng)基終止消化。
3. 過濾與離心：用細(xì)胞篩過濾細(xì)胞懸液，去除未消化的組織碎片，然后將濾液以適當(dāng)?shù)霓D(zhuǎn)速離心，收集細(xì)胞沉淀。
細(xì)胞觀察與檢測
1. 日常觀察：每天用倒置顯微鏡觀察細(xì)胞的形態(tài)、生長狀態(tài)、密度等，記錄細(xì)胞的變化情況，如發(fā)現(xiàn)細(xì)胞污染或異常，及時(shí)采取相應(yīng)措施。
2. 細(xì)胞計(jì)數(shù)與活力檢測：在需要時(shí)，可采用臺盼藍(lán)染色等方法對細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)和活力檢測，以了解細(xì)胞的生長情況和健康狀態(tài)。
人急性骨髓白血病細(xì)胞 | 大鼠滑膜細(xì)胞 |
小鼠胚胎成纖維細(xì)胞 | 甲基藍(lán)水溶液(MB，1%) |
人胚肺成纖維細(xì)胞 | 詹納斯綠B染色液(0.5%) |
子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞株 | 亮綠染色液(BG，2%) |
小細(xì)胞肺癌細(xì)胞 | 詹納斯綠B染色液(0.2%) |
人涎腺腺樣囊性癌細(xì)胞 | 鋁染色試劑盒(Lillie鋁試劑法) |
人絨毛膜癌細(xì)胞 | 尿鹽染色試劑盒(Gomori銀法) |
人食管癌細(xì)胞TE-7(STR鑒定正確) | 銅鹽染色試劑盒(紅氨法) |
人胰腺上皮樣癌細(xì)胞 | 鉬銨負(fù)染色液(3%) |
人喉癌上皮細(xì)胞 | 磷鎢負(fù)染色液(2%) |
人惡性黑色瘤瘤株 | 磷鎢負(fù)染色液(3%) |
人髓樣甲狀腺腫瘤細(xì)胞 | 磷鎢負(fù)染色液(5%) |
人膽管細(xì)胞型肝癌細(xì)胞 | 大鼠成骨細(xì)胞硫堇染色液(0.4%) |
人髓母細(xì)胞瘤細(xì)胞 | 硫堇染色液(1%) |
Diflapolin | 固綠染色液(FCF，0.1%) |
一、取材與分離
1. 快速操作
- 組織取材后需立即處理，避免長時(shí)間暴露于室溫或非營養(yǎng)環(huán)境。
- 使用無菌 PBS 或生理鹽水沖洗組織，去除血液、雜質(zhì)。
2. 消化酶選擇
- 根據(jù)組織類型選擇消化酶，避免過度消化導(dǎo)致細(xì)胞損傷。
- 消化時(shí)間需嚴(yán)格控制（通常 10-30 分鐘），可通過顯微鏡觀察細(xì)胞解離狀態(tài)。
二、培養(yǎng)條件優(yōu)化
1. 培養(yǎng)基選擇
- 使用含血清或特定生長因子的培養(yǎng)基（如 DMEM、RPMI 1640 等），部分細(xì)胞需添加胰島素、EGF 等。
- 避免頻繁更換培養(yǎng)基品牌或批次，減少細(xì)胞適應(yīng)壓力。
2. 貼壁與傳代
- 原代細(xì)胞貼壁能力較弱，可能需要包被培養(yǎng)皿（如膠原蛋白、多聚賴氨酸）。
- 傳代時(shí)密度建議控制在 70%-80%，過度匯合會導(dǎo)致接觸抑制和分化。
三、污染控制
1. 無菌操作
- 全程在超凈臺操作，使用一次性耗材，避免交叉污染。
- 培養(yǎng)基中可添加雙抗，但長期使用可能影響細(xì)胞活性。
2. 支原體檢測
- 定期檢測支原體污染（如 PCR 法），污染后需及時(shí)丟棄細(xì)胞。
四、狀態(tài)監(jiān)控
1. 日常觀察
- 每天檢查細(xì)胞形態(tài)、密度及培養(yǎng)基顏色，及時(shí)更換培養(yǎng)基（通常每 2-3 天換液一次）。
- 異常形態(tài)（如細(xì)胞變圓、碎片增多）可能提示污染或營養(yǎng)不足。
2. 傳代與凍存
- 原代細(xì)胞分裂次數(shù)有限（一般 5-10 代），需及時(shí)凍存早期代次細(xì)胞。
- 凍存液建議使用 DMSO+血清（或?qū)Ｓ脙龃媾囵B(yǎng)基），梯度降溫后液氮保存。
