產(chǎn)品名稱 | 大鼠大隱靜脈內(nèi)皮細(xì)胞 | 組織來源 | 大隱靜脈組織 |
規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 包裝 | T25培養(yǎng)瓶 |
貨號 | GOY-01X0968 | 細(xì)胞形態(tài) | 內(nèi)皮細(xì)胞樣 |
大鼠大隱靜脈內(nèi)皮分離自大隱靜脈；大隱靜脈起于足背靜脈弓內(nèi)側(cè)端，經(jīng)內(nèi)踝前方，沿小腿內(nèi)側(cè)緣伴隱神經(jīng)上行，經(jīng)股骨內(nèi)側(cè)髁后方，進(jìn)入大腿內(nèi)側(cè)部，與股內(nèi)側(cè)皮神經(jīng)伴行，逐漸向前上，在恥骨結(jié)節(jié)外下方穿隱靜脈裂孔，匯入股靜脈，其匯入點(diǎn)稱為隱股點(diǎn)。有5條屬支：旋髂淺靜脈、腹壁淺靜脈、外靜脈、股內(nèi)側(cè)淺靜脈和股外側(cè)淺靜脈，它們匯入大隱靜脈的形式多樣，相互間吻合豐富。大隱靜脈曲張行高位結(jié)扎時(shí)，須分別結(jié)扎、切斷各屬支，以防復(fù)發(fā)。大隱靜脈內(nèi)皮細(xì)胞對維持大隱靜脈動態(tài)平衡起著重要作用。它們合成、分泌凝血和纖溶系統(tǒng)的激活因子和抑制因子、影響血小板粘附和聚集的調(diào)節(jié)因子；大隱靜脈內(nèi)皮細(xì)胞還釋放控制細(xì)胞增殖和調(diào)節(jié)血管壁緊張度的分子。
方法簡介：
公司實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠大隱靜脈內(nèi)皮采用yi蛋白酶-膠原酶聯(lián)合消化法結(jié)合差速貼壁法、并通過內(nèi)皮細(xì)胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測：
公司實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠大隱靜脈內(nèi)皮經(jīng)CD31免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
本公司所有產(chǎn)品僅供科學(xué)實(shí)驗(yàn)，不做其他科學(xué)實(shí)驗(yàn)外的使用！
包被條件 PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%）
培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長特性 貼壁
細(xì)胞形態(tài) 內(nèi)皮細(xì)胞樣
傳代特性 可傳2-3代
消化液 0.25%yi蛋白酶
培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%
準(zhǔn)備工作
1. 實(shí)驗(yàn)器材準(zhǔn)備：準(zhǔn)備無菌的培養(yǎng)皿、培養(yǎng)瓶、移液管、離心管、手術(shù)器械等，并進(jìn)行高壓滅菌或其他合適的消毒處理。
2. 試劑準(zhǔn)備：配制或購買合適的培養(yǎng)基、消化酶（如、膠原酶等）、胎牛血清、雙抗等試劑，確保其無菌且在有效期內(nèi)。
3. 實(shí)驗(yàn)動物或組織來源準(zhǔn)備：根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求，選擇合適的動物并進(jìn)行相應(yīng)的麻醉或處死，獲取所需組織；或從已有的組織樣本庫中獲取組織。
取材與處理
1. 取材：在無菌條件下，迅速取出目標(biāo)組織，盡量減少對組織的損傷，并去除多余的脂肪、結(jié)締組織等非目的組織。
2. 清洗：將取出的組織用預(yù)冷的無菌PBS沖洗數(shù)次，以去除血液和雜質(zhì)。
3. 剪切：將組織剪成約1 - 2mm3的小塊，以便后續(xù)消化。
細(xì)胞分離
1. 消化：將剪碎的組織塊放入含有適量消化酶的離心管中，在37℃恒溫?fù)u床或培養(yǎng)箱中消化一段時(shí)間。期間可輕輕搖晃離心管，使消化更均勻。
2. 終止消化：當(dāng)組織塊大部分被消化成單細(xì)胞懸液或小細(xì)胞團(tuán)時(shí)，加入含血清的培養(yǎng)基終止消化。
3. 過濾與離心：用細(xì)胞篩過濾細(xì)胞懸液，去除未消化的組織碎片，然后將濾液以適當(dāng)?shù)霓D(zhuǎn)速離心，收集細(xì)胞沉淀。
細(xì)胞觀察與檢測
1. 日常觀察：每天用倒置顯微鏡觀察細(xì)胞的形態(tài)、生長狀態(tài)、密度等，記錄細(xì)胞的變化情況，如發(fā)現(xiàn)細(xì)胞污染或異常，及時(shí)采取相應(yīng)措施。
2. 細(xì)胞計(jì)數(shù)與活力檢測：在需要時(shí)，可采用臺盼藍(lán)染色等方法對細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)和活力檢測，以了解細(xì)胞的生長情況和健康狀態(tài)。
一、取材與分離
1. 快速操作
- 組織取材后需立即處理，避免長時(shí)間暴露于室溫或非營養(yǎng)環(huán)境。
- 使用無菌 PBS 或生理鹽水沖洗組織，去除血液、雜質(zhì)。
2. 消化酶選擇
- 根據(jù)組織類型選擇消化酶，避免過度消化導(dǎo)致細(xì)胞損傷。
- 消化時(shí)間需嚴(yán)格控制（通常 10-30 分鐘），可通過顯微鏡觀察細(xì)胞解離狀態(tài)。
二、培養(yǎng)條件優(yōu)化
1. 培養(yǎng)基選擇
- 使用含血清或特定生長因子的培養(yǎng)基（如 DMEM、RPMI 1640 等），部分細(xì)胞需添加胰島素、EGF 等。
- 避免頻繁更換培養(yǎng)基品牌或批次，減少細(xì)胞適應(yīng)壓力。
2. 貼壁與傳代
- 原代細(xì)胞貼壁能力較弱，可能需要包被培養(yǎng)皿（如膠原蛋白、多聚賴氨酸）。
- 傳代時(shí)密度建議控制在 70%-80%，過度匯合會導(dǎo)致接觸抑制和分化。
三、污染控制
1. 無菌操作
- 全程在超凈臺操作，使用一次性耗材，避免交叉污染。
- 培養(yǎng)基中可添加雙抗，但長期使用可能影響細(xì)胞活性。
2. 支原體檢測
- 定期檢測支原體污染（如 PCR 法），污染后需及時(shí)丟棄細(xì)胞。
四、狀態(tài)監(jiān)控
1. 日常觀察
- 每天檢查細(xì)胞形態(tài)、密度及培養(yǎng)基顏色，及時(shí)更換培養(yǎng)基（通常每 2-3 天換液一次）。
- 異常形態(tài)（如細(xì)胞變圓、碎片增多）可能提示污染或營養(yǎng)不足。
2. 傳代與凍存
- 原代細(xì)胞分裂次數(shù)有限（一般 5-10 代），需及時(shí)凍存早期代次細(xì)胞。
- 凍存液建議使用 DMSO+血清（或?qū)Ｓ脙龃媾囵B(yǎng)基），梯度降溫后液氮保存。
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