本公司所有產(chǎn)品僅供科學(xué)實(shí)驗(yàn)，不做其他科學(xué)實(shí)驗(yàn)外的使用！
產(chǎn)品名稱 | 組織來源 | 肝動(dòng)脈組織 | |
規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 包裝 | T25培養(yǎng)瓶 |
貨號(hào) | GOY-01X0860 | 細(xì)胞形態(tài) | 成纖維細(xì)胞樣 |
人肝動(dòng)脈平滑肌分離自肝動(dòng)脈組織；在胚胎期，肝臟有3條動(dòng)脈供血，分別來源于胃左動(dòng)脈、腹腔動(dòng)脈和腸系膜上動(dòng)脈，這3條動(dòng)脈分別肝臟的不同部位。出生后，一般保留一條動(dòng)脈，大部分為起源于腹腔動(dòng)脈的動(dòng)脈，由其分出左、右肝動(dòng)脈供應(yīng)左、右半肝。偶爾也可見起源于胃左動(dòng)脈的動(dòng)脈或起源于腸系膜上動(dòng)脈的動(dòng)脈。但也有2條動(dòng)脈并存的情況，如起源于腹腔動(dòng)脈和起源于胃左動(dòng)脈（25%），起源于腹腔動(dòng)脈和起源于腸系臘上動(dòng)脈（10%），而起源于胃左動(dòng)脈和起源于腸系膜上動(dòng)脈的2條動(dòng)脈同時(shí)存在的情況比較少見。此外，還有5%像胚胎期一樣，3條動(dòng)脈同時(shí)存在。這種起源于腹腔動(dòng)脈以外的肝動(dòng)脈稱為迷走肝動(dòng)脈，如果肝臟沒有起源于腹腔動(dòng)脈的動(dòng)脈供血時(shí)，此種異位起源的肝動(dòng)脈稱替代動(dòng)脈，如果在常見肝動(dòng)脈類型外，還有一支這種異位起始的動(dòng)脈肝臟的一部分血流，這種肝動(dòng)脈稱副肝動(dòng)脈。肝動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞是肝動(dòng)脈的重要結(jié)構(gòu)細(xì)胞之一，在機(jī)體的正常生理過程中發(fā)揮著重要作用。肝動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞原代分離培養(yǎng)3天后，可見細(xì)胞貼壁伸展，細(xì)胞形態(tài)大小不一，呈梭形、不規(guī)則形、三角形或扇形，核卵圓形、居中；2周后細(xì)胞匯合，多數(shù)細(xì)胞伸展呈長(zhǎng)梭形，胞漿豐富，有分枝狀突起，細(xì)胞平行排列成單層或部分區(qū)域多層重疊生長(zhǎng)，高低起伏；細(xì)胞密度低時(shí)，常交織成網(wǎng)狀；密度高時(shí)，則排列為旋渦狀或柵欄狀。傳代后細(xì)胞生長(zhǎng)較快，4-6天即可匯合，并保持上述形態(tài)學(xué)特征和生長(zhǎng)特點(diǎn)。血管平滑肌細(xì)胞的加速生長(zhǎng)潛能是血管疾病進(jìn)展的關(guān)鍵因素，最新研究表明血管平滑肌細(xì)胞表達(dá)的ICAM-1和VCAM-1能促進(jìn)血管壁的炎癥反應(yīng)，并且與血管疾病的發(fā)展及穩(wěn)定性有關(guān)。
方法簡(jiǎn)介：
公司實(shí)驗(yàn)室分離的人肝動(dòng)脈平滑肌采用yi蛋白酶-膠原酶聯(lián)合消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測(cè)：
公司實(shí)驗(yàn)室分離的人肝動(dòng)脈平滑肌經(jīng)α-SMA免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
培養(yǎng)基 含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長(zhǎng)特性 貼壁
細(xì)胞形態(tài) 成纖維細(xì)胞樣
傳代特性 可傳5代左右；3代以內(nèi)狀態(tài)
消化液 0.25%yi蛋白酶
培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%
準(zhǔn)備工作
1. 實(shí)驗(yàn)器材準(zhǔn)備：準(zhǔn)備無菌的培養(yǎng)皿、培養(yǎng)瓶、移液管、離心管、手術(shù)器械等，并進(jìn)行高壓滅菌或其他合適的消毒處理。
2. 試劑準(zhǔn)備：配制或購(gòu)買合適的培養(yǎng)基、消化酶（如、膠原酶等）、胎牛血清、雙抗等試劑，確保其無菌且在有效期內(nèi)。
3. 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物或組織來源準(zhǔn)備：根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求，選擇合適的動(dòng)物并進(jìn)行相應(yīng)的麻醉或處死，獲取所需組織；或從已有的組織樣本庫(kù)中獲取組織。
取材與處理
1. 取材：在無菌條件下，迅速取出目標(biāo)組織，盡量減少對(duì)組織的損傷，并去除多余的脂肪、結(jié)締組織等非目的組織。
2. 清洗：將取出的組織用預(yù)冷的無菌PBS沖洗數(shù)次，以去除血液和雜質(zhì)。
3. 剪切：將組織剪成約1 - 2mm3的小塊，以便后續(xù)消化。
細(xì)胞分離
1. 消化：將剪碎的組織塊放入含有適量消化酶的離心管中，在37℃恒溫?fù)u床或培養(yǎng)箱中消化一段時(shí)間。期間可輕輕搖晃離心管，使消化更均勻。
2. 終止消化：當(dāng)組織塊大部分被消化成單細(xì)胞懸液或小細(xì)胞團(tuán)時(shí)，加入含血清的培養(yǎng)基終止消化。
3. 過濾與離心：用細(xì)胞篩過濾細(xì)胞懸液，去除未消化的組織碎片，然后將濾液以適當(dāng)?shù)霓D(zhuǎn)速離心，收集細(xì)胞沉淀。
細(xì)胞觀察與檢測(cè)
1. 日常觀察：每天用倒置顯微鏡觀察細(xì)胞的形態(tài)、生長(zhǎng)狀態(tài)、密度等，記錄細(xì)胞的變化情況，如發(fā)現(xiàn)細(xì)胞污染或異常，及時(shí)采取相應(yīng)措施。
2. 細(xì)胞計(jì)數(shù)與活力檢測(cè)：在需要時(shí)，可采用臺(tái)盼藍(lán)染色等方法對(duì)細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)和活力檢測(cè)，以了解細(xì)胞的生長(zhǎng)情況和健康狀態(tài)。
人頸動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞 | 人頸靜脈球瘤細(xì)胞 |
人口腔成纖維細(xì)胞 | 尤特克單抗 |
人口腔黏膜上皮細(xì)胞 | 曲美木單抗 |
人類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎滑膜成纖維細(xì)胞 | 阿達(dá)木單抗 |
人淋巴管成纖維細(xì)胞 | 伊匹單抗 |
人淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞 | 依帕伐單抗 |
人卵巢成纖維細(xì)胞 | Sabatolimab |
人慢性髓系白血病細(xì)胞 | 瑞拉利單抗 |
人卵巢囊腫細(xì)胞 | 布羅達(dá)單抗 |
人卵巢微血管內(nèi)皮細(xì)胞 | 蘇金單抗 |
人脈絡(luò)膜成纖維細(xì)胞 | 塞妥昔單抗 |
人脈絡(luò)膜微血管內(nèi)皮細(xì)胞 | 西魯庫(kù)單抗 |
人毛囊成纖維細(xì)胞 | 人肝動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞托珠單抗 |
人毛囊干細(xì)胞 | 度匹魯單抗 |
次甲基綠 | 阿維單抗 |
一、取材與分離
1. 快速操作
- 組織取材后需立即處理，避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于室溫或非營(yíng)養(yǎng)環(huán)境。
- 使用無菌 PBS 或生理鹽水沖洗組織，去除血液、雜質(zhì)。
2. 消化酶選擇
- 根據(jù)組織類型選擇消化酶，避免過度消化導(dǎo)致細(xì)胞損傷。
- 消化時(shí)間需嚴(yán)格控制（通常 10-30 分鐘），可通過顯微鏡觀察細(xì)胞解離狀態(tài)。
二、培養(yǎng)條件優(yōu)化
1. 培養(yǎng)基選擇
- 使用含血清或特定生長(zhǎng)因子的培養(yǎng)基（如 DMEM、RPMI 1640 等），部分細(xì)胞需添加胰島素、EGF 等。
- 避免頻繁更換培養(yǎng)基品牌或批次，減少細(xì)胞適應(yīng)壓力。
2. 貼壁與傳代
- 原代細(xì)胞貼壁能力較弱，可能需要包被培養(yǎng)皿（如膠原蛋白、多聚賴氨酸）。
- 傳代時(shí)密度建議控制在 70%-80%，過度匯合會(huì)導(dǎo)致接觸抑制和分化。
三、污染控制
1. 無菌操作
- 全程在超凈臺(tái)操作，使用一次性耗材，避免交叉污染。
- 培養(yǎng)基中可添加雙抗，但長(zhǎng)期使用可能影響細(xì)胞活性。
2. 支原體檢測(cè)
- 定期檢測(cè)支原體污染（如 PCR 法），污染后需及時(shí)丟棄細(xì)胞。
四、狀態(tài)監(jiān)控
1. 日常觀察
- 每天檢查細(xì)胞形態(tài)、密度及培養(yǎng)基顏色，及時(shí)更換培養(yǎng)基（通常每 2-3 天換液一次）。
- 異常形態(tài)（如細(xì)胞變圓、碎片增多）可能提示污染或營(yíng)養(yǎng)不足。
2. 傳代與凍存
- 原代細(xì)胞分裂次數(shù)有限（一般 5-10 代），需及時(shí)凍存早期代次細(xì)胞。
- 凍存液建議使用 DMSO+血清（或?qū)Ｓ脙龃媾囵B(yǎng)基），梯度降溫后液氮保存。
