本公司所有產(chǎn)品僅供科學(xué)實(shí)驗(yàn),不做其他科學(xué)實(shí)驗(yàn)外的使用!
產(chǎn)品名稱(chēng) | 小鼠肝動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞 | 組織來(lái)源 | 肝動(dòng)脈組織 |
規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 包裝 | T25培養(yǎng)瓶 |
貨號(hào) | GOY-01X0818 | 細(xì)胞形態(tài) | 內(nèi)皮細(xì)胞樣 |
小鼠肝動(dòng)脈內(nèi)皮分離自肝動(dòng)脈組織;在胚胎期,肝臟有3條動(dòng)脈供血,分別來(lái)源于胃左動(dòng)脈、腹腔動(dòng)脈和腸系膜上動(dòng)脈,這3條動(dòng)脈分別肝臟的不同部位。出生后,一般保留一條動(dòng)脈,大部分為起源于腹腔動(dòng)脈的動(dòng)脈,由其分出左、右肝動(dòng)脈供應(yīng)左、右半肝。偶爾也可見(jiàn)起源于胃左動(dòng)脈的動(dòng)脈或起源于腸系膜上動(dòng)脈的動(dòng)脈。但也有2條動(dòng)脈并存的情況,如起源于腹腔動(dòng)脈和起源于胃左動(dòng)脈(25%),起源于腹腔動(dòng)脈和起源于腸系臘上動(dòng)脈(10%),而起源于胃左動(dòng)脈和起源于腸系膜上動(dòng)脈的2條動(dòng)脈同時(shí)存在的情況比較少見(jiàn)。此外,還有5%像胚胎期一樣,3條動(dòng)脈同時(shí)存在。這種起源于腹腔動(dòng)脈以外的肝動(dòng)脈稱(chēng)為迷走肝動(dòng)脈,如果肝臟沒(méi)有起源于腹腔動(dòng)脈的動(dòng)脈供血時(shí),此種異位起源的肝動(dòng)脈稱(chēng)替代動(dòng)脈,如果在常見(jiàn)肝動(dòng)脈類(lèi)型外,還有一支這種異位起始的動(dòng)脈肝臟的一部分血流,這種肝動(dòng)脈稱(chēng)副肝動(dòng)脈。肝動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞是襯于肝動(dòng)脈內(nèi)表面的單層扁平上皮,在炎癥時(shí)高表達(dá)黏附分子,與血流中白細(xì)胞表面黏附分子相互作用,從而介導(dǎo)白細(xì)胞穿越血管壁,亦屬一類(lèi)非專(zhuān)職抗原提呈細(xì)胞。它們吞噬異物、細(xì)菌、壞死和衰老的組織,還參與集體免疫活動(dòng),包括:①血管收縮及血管舒張,從而控制血壓;②凝血(血栓形成及纖維蛋白溶解);③動(dòng)脈硬化;④血管生成;⑤炎癥及腫脹(浮腫);⑥內(nèi)皮細(xì)胞亦控制一些物質(zhì),如白血球進(jìn)出血管。
方法簡(jiǎn)介:
公司實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠肝動(dòng)脈內(nèi)皮采用混合酶消化法結(jié)合差速貼壁法,并通過(guò)內(nèi)皮細(xì)胞專(zhuān)用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來(lái),細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測(cè):
公司實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠肝動(dòng)脈內(nèi)皮經(jīng)CD31免疫熒光鑒定,純度可達(dá)90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
包被條件 PLL(0.1mg/ml),明膠(0.1%)
培養(yǎng)基 含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長(zhǎng)特性 貼壁
細(xì)胞形態(tài) 內(nèi)皮細(xì)胞樣
傳代特性 可傳2-3代
消化液 0.25%yi蛋白酶
培養(yǎng)條件 氣相:空氣,95%;CO2,5%
準(zhǔn)備工作
1. 實(shí)驗(yàn)器材準(zhǔn)備:準(zhǔn)備無(wú)菌的培養(yǎng)皿、培養(yǎng)瓶、移液管、離心管、手術(shù)器械等,并進(jìn)行高壓滅菌或其他合適的消毒處理。
2. 試劑準(zhǔn)備:配制或購(gòu)買(mǎi)合適的培養(yǎng)基、消化酶(如、膠原酶等)、胎牛血清、雙抗等試劑,確保其無(wú)菌且在有效期內(nèi)。
3. 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物或組織來(lái)源準(zhǔn)備:根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求,選擇合適的動(dòng)物并進(jìn)行相應(yīng)的麻醉或處死,獲取所需組織;或從已有的組織樣本庫(kù)中獲取組織。
取材與處理
1. 取材:在無(wú)菌條件下,迅速取出目標(biāo)組織,盡量減少對(duì)組織的損傷,并去除多余的脂肪、結(jié)締組織等非目的組織。
2. 清洗:將取出的組織用預(yù)冷的無(wú)菌PBS沖洗數(shù)次,以去除血液和雜質(zhì)。
3. 剪切:將組織剪成約1 - 2mm3的小塊,以便后續(xù)消化。
細(xì)胞分離
1. 消化:將剪碎的組織塊放入含有適量消化酶的離心管中,在37℃恒溫?fù)u床或培養(yǎng)箱中消化一段時(shí)間。期間可輕輕搖晃離心管,使消化更均勻。
2. 終止消化:當(dāng)組織塊大部分被消化成單細(xì)胞懸液或小細(xì)胞團(tuán)時(shí),加入含血清的培養(yǎng)基終止消化。
3. 過(guò)濾與離心:用細(xì)胞篩過(guò)濾細(xì)胞懸液,去除未消化的組織碎片,然后將濾液以適當(dāng)?shù)霓D(zhuǎn)速離心,收集細(xì)胞沉淀。
細(xì)胞觀察與檢測(cè)
1. 日常觀察:每天用倒置顯微鏡觀察細(xì)胞的形態(tài)、生長(zhǎng)狀態(tài)、密度等,記錄細(xì)胞的變化情況,如發(fā)現(xiàn)細(xì)胞污染或異常,及時(shí)采取相應(yīng)措施。
2. 細(xì)胞計(jì)數(shù)與活力檢測(cè):在需要時(shí),可采用臺(tái)盼藍(lán)染色等方法對(duì)細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)和活力檢測(cè),以了解細(xì)胞的生長(zhǎng)情況和健康狀態(tài)。
昆蟲(chóng)細(xì)胞;Hi-five(BTI-TN-5B1-4) | 人乳腺癌細(xì)胞;BT474 |
牛腎細(xì)胞;MDBK(BVDV-free) | FASTDIGEST TASI |
人橫紋肌肉瘤細(xì)胞;RD | FASTDIGEST TAAI |
人急性淋巴白血病細(xì)胞;Kasumi-1 | FASTDIGEST CAII |
人乳腺癌細(xì)胞;MDA-MB-231 | FASTDIGEST SCHI |
人骨髓瘤細(xì)胞;NCI-H929 | FASTDIGEST BSEMII |
昆蟲(chóng)細(xì)胞;SDM | FASTDIGEST APAI |
人膽囊上皮細(xì)胞永生化 | FASTDIGEST BME1390I |
倍體細(xì)胞/人胚肺成纖維細(xì)胞;2BS | FASTDIGEST MSSI |
昆蟲(chóng)細(xì)胞;BGE1-L15B | FASTDIGEST PSYI |
人外周淋巴細(xì)胞;U266B1 | FASTDIGEST BPLI |
小鼠骨髓纖維原細(xì)胞;M2-10B4 | FASTDIGEST XAGI |
人結(jié)腸腺癌細(xì)胞;SW48 | FASTDIGEST TATI |
人肺腺癌細(xì)胞;NCI-H441 | FASTDIGEST PAGI |
固藍(lán)BB鹽 | FASTDIGEST MBII |
一、取材與分離
1. 快速操作
- 組織取材后需立即處理,避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于室溫或非營(yíng)養(yǎng)環(huán)境。
- 使用無(wú)菌 PBS 或生理鹽水沖洗組織,去除血液、雜質(zhì)。
2. 消化酶選擇
- 根據(jù)組織類(lèi)型選擇消化酶,避免過(guò)度消化導(dǎo)致細(xì)胞損傷。
- 消化時(shí)間需嚴(yán)格控制(通常 10-30 分鐘),可通過(guò)顯微鏡觀察細(xì)胞解離狀態(tài)。
二、培養(yǎng)條件優(yōu)化
1. 培養(yǎng)基選擇
- 使用含血清或特定生長(zhǎng)因子的培養(yǎng)基(如 DMEM、RPMI 1640 等),部分細(xì)胞需添加胰島素、EGF 等。
- 避免頻繁更換培養(yǎng)基品牌或批次,減少細(xì)胞適應(yīng)壓力。
2. 貼壁與傳代
- 原代細(xì)胞貼壁能力較弱,可能需要包被培養(yǎng)皿(如膠原蛋白、多聚賴(lài)氨酸)。
- 傳代時(shí)密度建議控制在 70%-80%,過(guò)度匯合會(huì)導(dǎo)致接觸抑制和分化。
三、污染控制
1. 無(wú)菌操作
- 全程在超凈臺(tái)操作,使用一次性耗材,避免交叉污染。
- 培養(yǎng)基中可添加雙抗,但長(zhǎng)期使用可能影響細(xì)胞活性。
2. 支原體檢測(cè)
- 定期檢測(cè)支原體污染(如 PCR 法),污染后需及時(shí)丟棄細(xì)胞。
四、狀態(tài)監(jiān)控
1. 日常觀察
- 每天檢查細(xì)胞形態(tài)、密度及培養(yǎng)基顏色,及時(shí)更換培養(yǎng)基(通常每 2-3 天換液一次)。
- 異常形態(tài)(如細(xì)胞變圓、碎片增多)可能提示污染或營(yíng)養(yǎng)不足。
2. 傳代與凍存
- 原代細(xì)胞分裂次數(shù)有限(一般 5-10 代),需及時(shí)凍存早期代次細(xì)胞。
- 凍存液建議使用 DMSO+血清(或?qū)S脙龃媾囵B(yǎng)基),梯度降溫后液氮保存。
昆蟲(chóng)細(xì)胞;Hi-five(BTI-TN-5B1-4) | 人乳腺癌細(xì)胞;BT474 |
牛腎細(xì)胞;MDBK(BVDV-free) | FASTDIGEST TASI |
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人骨髓瘤細(xì)胞;NCI-H929 | FASTDIGEST BSEMII |
昆蟲(chóng)細(xì)胞;SDM | FASTDIGEST APAI |
人膽囊上皮細(xì)胞永生化 | FASTDIGEST BME1390I |
倍體細(xì)胞/人胚肺成纖維細(xì)胞;2BS | FASTDIGEST MSSI |
昆蟲(chóng)細(xì)胞;BGE1-L15B | FASTDIGEST PSYI |
人外周淋巴細(xì)胞;U266B1 | FASTDIGEST BPLI |
小鼠骨髓纖維原細(xì)胞;M2-10B4 | FASTDIGEST XAGI |
人結(jié)腸腺癌細(xì)胞;SW48 | 小鼠肝動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞FASTDIGEST TATI |
人肺腺癌細(xì)胞;NCI-H441 | FASTDIGEST PAGI |
固藍(lán)BB鹽 | FASTDIGEST MBII |