本公司所有產(chǎn)品僅供科學實驗，不做其他科學實驗外的使用！
產(chǎn)品名稱 | 小鼠神經(jīng)少突膠質(zhì)前體細胞 | 組織來源 | 腦組織 |
規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 包裝 | T25培養(yǎng)瓶 |
貨號 | GOY-01X1396 | 細胞形態(tài) | 雙極、多極形 |
小鼠神經(jīng)少突膠質(zhì)前體分離自腦皮層組織；大腦分左右兩個半球，大腦皮質(zhì)（灰質(zhì)）覆蓋著每個大腦半球的大部分，它是神經(jīng)元胞體集中的地方。內(nèi)部則是由神經(jīng)纖維或髓鞘構成的白質(zhì)。少突膠質(zhì)細胞分布于中樞神經(jīng)系統(tǒng)，在銀浸染標本中，少突膠質(zhì)細胞比星狀膠質(zhì)細胞小，其突起也較小而少，呈珠狀，故被稱為少突膠質(zhì)細胞或寡突膠質(zhì)細胞。少突膠質(zhì)細胞（oligodendrocyte）是中樞神經(jīng)系統(tǒng)（CNS）的成髓鞘神經(jīng)膠質(zhì)細胞，其發(fā)育要經(jīng)歷少突膠質(zhì)細胞祖細胞、前少突膠質(zhì)細胞祖細胞、未成熟和成熟少突膠質(zhì)細胞等階段。有學者將少突膠質(zhì)細胞按其發(fā)育程度和形態(tài)分為三型。但是，細胞發(fā)育是一個連續(xù)的過程，其形態(tài)、表達產(chǎn)物和功能的演變沒有嚴格的界限，因此，其分類是相對的。這三型分別為：Ⅰ型少突膠質(zhì)細胞又稱前O2A（pre-O2A progenitor cell）。細胞呈圓形，表面光滑，直徑約3μm，體外混合培養(yǎng)時成簇生長在星形膠質(zhì)表面，具有很強的分裂增殖潛力，表達神經(jīng)節(jié)苷GM1、波形蛋白和多唾液酸—神經(jīng)粘附分子（polysialic acid-neural cell adhesion molecule，PSA-NCAM）等。Ⅱ型少突膠質(zhì)細胞胞體常有雙極或三極突起，極少數(shù)為單極突起，直徑約7μm，有一定的分裂增殖能力。體外培養(yǎng)時為雙潛能細胞，既可分化為少突膠質(zhì)細胞又可分化為Ⅱ型星形膠質(zhì)，故又稱為少突膠質(zhì)細胞-Ⅱ型星形膠質(zhì)祖細胞（oligodendrocyte-type-2 astrocyte progenitor cell，O2A）。O2A除表達GM1和波形蛋白外還表達神經(jīng)節(jié)苷GD3和GQ（淋巴雜交瘤株A2B5產(chǎn)生GQ的抗體），故常用A2B5抗體標記O2A。Ⅲ型少突膠質(zhì)細胞不再具有分裂增殖能力，為分裂終期細胞。直徑約10μm。根據(jù)其形成髓鞘的能力，又分為不成熟的和成熟的兩類少突膠質(zhì)細胞。不成熟的OL胞體常伸出4～5條較粗大突起，表面還殘留有A2B5標記物，同時也表達O1-O4抗原，無形成髓鞘的能力。成熟的少突膠質(zhì)細胞突起有如蜘蛛網(wǎng)，大量表達半乳糖腦苷脂（galactocerebro side，GC）、蛋白脂蛋白（proteio lipid protein，PLP）、髓鞘堿性蛋白（myelin basic protein，MBP）等，有對軸突髓鞘化的能力。體外培養(yǎng)的少突膠質(zhì)細胞前體細胞（簡稱少突膠質(zhì)細胞前體細胞）包括前O2A和O2A和未成熟少突膠質(zhì)細胞，前兩者具有增殖能力。
方法簡介：
公司實驗室分離的小鼠神經(jīng)少突膠質(zhì)采用yi蛋白酶消化、混合細胞營養(yǎng)缺失培養(yǎng)、搖床振蕩結(jié)合差速貼壁法并通過專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細胞總量約為5×105cells/瓶。
質(zhì)量檢測：
公司實驗室分離的小鼠神經(jīng)少突膠質(zhì)前體經(jīng)A2B5免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。
包被條件 PLL（0.1mg/ml）
培養(yǎng)基 含B-27 Supplement、PDGF、bFGF、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2天半量換液1次
生長特性 貼壁
細胞形態(tài) 雙極、多極形
傳代特性 不傳代，不增值，存活1-2周
消化液 0.25%yi蛋白酶
培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%
準備工作
1. 實驗器材準備：準備無菌的培養(yǎng)皿、培養(yǎng)瓶、移液管、離心管、手術器械等，并進行高壓滅菌或其他合適的消毒處理。
2. 試劑準備：配制或購買合適的培養(yǎng)基、消化酶（如、膠原酶等）、胎牛血清、雙抗等試劑，確保其無菌且在有效期內(nèi)。
3. 實驗動物或組織來源準備：根據(jù)實驗需求，選擇合適的動物并進行相應的麻醉或處死，獲取所需組織；或從已有的組織樣本庫中獲取組織。
取材與處理
1. 取材：在無菌條件下，迅速取出目標組織，盡量減少對組織的損傷，并去除多余的脂肪、結(jié)締組織等非目的組織。
2. 清洗：將取出的組織用預冷的無菌PBS沖洗數(shù)次，以去除血液和雜質(zhì)。
3. 剪切：將組織剪成約1 - 2mm3的小塊，以便后續(xù)消化。
細胞分離
1. 消化：將剪碎的組織塊放入含有適量消化酶的離心管中，在37℃恒溫搖床或培養(yǎng)箱中消化一段時間。期間可輕輕搖晃離心管，使消化更均勻。
2. 終止消化：當組織塊大部分被消化成單細胞懸液或小細胞團時，加入含血清的培養(yǎng)基終止消化。
3. 過濾與離心：用細胞篩過濾細胞懸液，去除未消化的組織碎片，然后將濾液以適當?shù)霓D(zhuǎn)速離心，收集細胞沉淀。
細胞觀察與檢測
1. 日常觀察：每天用倒置顯微鏡觀察細胞的形態(tài)、生長狀態(tài)、密度等，記錄細胞的變化情況，如發(fā)現(xiàn)細胞污染或異常，及時采取相應措施。
2. 細胞計數(shù)與活力檢測：在需要時，可采用臺盼藍染色等方法對細胞進行計數(shù)和活力檢測，以了解細胞的生長情況和健康狀態(tài)。
小鼠骨髓瘤細胞；Fox-NY | 小鼠胚胎成纖維細胞；MEF |
野生型人c-kit受體細胞株；A7d | 蓮須 對照藥材 |
小鼠原B細胞株；BaF3 | 鎖陽 對照藥材 |
小鼠腦瘤細胞；BC3H1 | 喜馬拉雅紫茉莉 對照藥材 |
小鼠胚胎成纖維細胞；C3H 10T1/2 2A6 | 烈香杜鵑 對照藥材 |
小鼠樹突狀細胞肉瘤細胞；DCS | 側(cè)柏葉 對照藥材 |
小鼠乳腺癌細胞；CCC-Ca761-03 | 兒茶(兒茶) 對照藥材 |
小鼠冠狀動脈平滑肌細胞 | 大紅袍 對照藥材 |
小鼠肺腺癌細胞系；LA795 | 寬筋藤 對照藥材 |
C3H/An小鼠結(jié)締組織細胞（L929-TK-）；LTK- | 檳榔花 對照藥材 |
小鼠B淋巴細胞雜交瘤細胞；SH2 | 沙棘膏 對照藥材 |
小鼠B淋巴細胞雜交瘤細胞；SH3 | 菊苣（毛菊苣） 對照藥材 |
倉鼠/小鼠雜交瘤細胞；145-2C11 | 小鼠神經(jīng)少突膠質(zhì)前體細胞車前草 對照藥材 |
小鼠T淋巴細胞；Cl.Ly1+2-/9 | 連錢草 對照藥材 |
B2（核黃） | 搜山虎 對照藥材 |
一、取材與分離
1. 快速操作
- 組織取材后需立即處理，避免長時間暴露于室溫或非營養(yǎng)環(huán)境。
- 使用無菌 PBS 或生理鹽水沖洗組織，去除血液、雜質(zhì)。
2. 消化酶選擇
- 根據(jù)組織類型選擇消化酶，避免過度消化導致細胞損傷。
- 消化時間需嚴格控制（通常 10-30 分鐘），可通過顯微鏡觀察細胞解離狀態(tài)。
二、培養(yǎng)條件優(yōu)化
1. 培養(yǎng)基選擇
- 使用含血清或特定生長因子的培養(yǎng)基（如 DMEM、RPMI 1640 等），部分細胞需添加胰島素、EGF 等。
- 避免頻繁更換培養(yǎng)基品牌或批次，減少細胞適應壓力。
2. 貼壁與傳代
- 原代細胞貼壁能力較弱，可能需要包被培養(yǎng)皿（如膠原蛋白、多聚賴氨酸）。
- 傳代時密度建議控制在 70%-80%，過度匯合會導致接觸抑制和分化。
三、污染控制
1. 無菌操作
- 全程在超凈臺操作，使用一次性耗材，避免交叉污染。
- 培養(yǎng)基中可添加雙抗，但長期使用可能影響細胞活性。
2. 支原體檢測
- 定期檢測支原體污染（如 PCR 法），污染后需及時丟棄細胞。
四、狀態(tài)監(jiān)控
1. 日常觀察
- 每天檢查細胞形態(tài)、密度及培養(yǎng)基顏色，及時更換培養(yǎng)基（通常每 2-3 天換液一次）。
- 異常形態(tài)（如細胞變圓、碎片增多）可能提示污染或營養(yǎng)不足。
2. 傳代與凍存
- 原代細胞分裂次數(shù)有限（一般 5-10 代），需及時凍存早期代次細胞。
- 凍存液建議使用 DMSO+血清（或?qū)Ｓ脙龃媾囵B(yǎng)基），梯度降溫后液氮保存。
