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 產品名稱： 人三碘甲狀腺原氨酸（T3）ELISA Kit 

產品英文： Human Tri-iodothyronine,T3 ELISA Kit 

產品規格： 96T 

產品類別： 人激素類ELISA試劑盒[Human hormone ELISA Kit]

人三碘甲狀腺原氨酸酶聯免疫分析（T3） ELISA試劑盒使用說明書

本試劑盒僅供研究研究使用

預期應用

ELISA法定量測定人血清、血漿、或其它相關液體中T3含量。

概述

T3是甲狀腺分泌的兩種主要激素之一。它有兩個來源：一是甲狀腺直接分泌，二是由T4外環脫去一個碘原子而生成，T3是含碘的氨基酸衍生物，由一個分子一碘*和一個分子二碘*偶聯而成，分子量651D。T3是診斷甲亢的*指標，血清T3濃度的測定對甲狀腺功能的評價和早期診斷甲亢很有價值，同時對甲亢的療效觀察及判定預后也有重要價值。

實驗原理

本試劑盒應用競爭抑制酶標免疫分析法測定標本中T3水平。用純化的抗體包被微孔板，制成固相抗體，固相抗體與一定量的*標記的T3和非標記抗原（標本或標準品）進行競爭抑制反應，待測定的標本量越多，抗體與*標記的T3結合就越少，反之結合就多。zui后再加入HRP標記的親和素，經過*洗滌后用底物TMB顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的T3呈負相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），計算樣品濃度。

試劑盒組成 

1． 酶聯板：一塊（96孔） 

2． T3標準品：1ml/瓶×6瓶。其濃度依次為10 ng /mL ，5 ng /mL，2.5 ng /mL和 1.25 ng /mL，0.625 ng/mL，0 ng/mL。

3． 檢測溶液A：1×6 ml

4． 檢測溶液B：1×6 ml

5． 底物溶液A：1×6 ml

6． 底物溶液B：1×6 ml

7． 濃洗滌液：2 ×25ml，使用時每瓶用蒸餾水稀釋25倍。 

8． 終止液：1×6ml。

標本的采集及保存 

1．血清：標本請于室溫放置2小時或4℃過夜后于1000 x g離心20分鐘，取上清即可檢測，或將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融。

2．血漿：可用EDTA或肝素作為抗凝劑，標本采集后30分鐘內于2 - 8° C 1000 x g離心15分鐘，或將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融。

注：標本溶血會影響zui后檢測結果，因此溶血標本不宜進行此項檢測。

操作步驟

各試劑在使用前平衡至室溫。

1． 加樣：分別設空白孔、標準孔、待測樣品孔。除空白孔外，余孔分別加標準溶液或待測樣品50μl，以及檢測溶液A 50μl，輕輕混勻，37℃，60分鐘。

2． 洗板3-5次，350μl/每孔，甩干。 

3． 每孔加檢測溶液 B 50μl，37℃，30分鐘，洗板3-5次，甩干。

4． 依序每孔加底物溶液A、B各50μl，37℃避光顯色15分鐘。

5． 依序每孔加終止溶液50μl，終止反應。用酶聯儀在450nm波長依序測量各孔的光密度（OD值）。 

注：

1． 每次實驗留一孔作為空白調零孔，該孔不加任何試劑，只是zui后加底物溶液及2NH2SO4。測量時先用此孔調OD值至零。 

2．為防止樣品蒸發，試驗時將反應板放于鋪有濕布的密閉盒內。

洗板方法

手工洗板方法：吸去（不可觸及板壁）或甩掉酶標板內的液體；在實驗臺上鋪墊幾層

吸水紙，酶標板朝下用力拍幾次；將*的洗滌緩沖液至少0.4ml注入孔內，浸泡1-2分鐘，根據需要，重復此過程數次。

    自動洗板：如果有自動洗板機，應在熟練使用后再用到正式實驗過程中。

特異性

    本試劑盒可同時檢測重組或天然的人T3，且與其它相關蛋白無交叉反應。

檢測范圍：

0. 15 ng /mL -40 ng /mL

計算

  以標準物的濃度為橫坐標（對數坐標），OD值為縱坐標（普通坐標），在半對數坐標紙上繪出標準曲線，根據樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度；再乘以稀釋倍數；或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數，即為樣品的實際濃度。

注意事項

1． 洗滌過程非常重要，不充分的洗滌易造成假陽性。

2． 一次加樣時間控制在5分鐘內，如標本數量多，*使用排槍加樣。

3． 請每次測定的同時做標準曲線，做復孔。

4． 如標本中T3含量過高，請先稀釋后再測定，計算時請zui后乘以稀釋倍數。

5． 底物請避光保存。

6．溫育反應過程中請帖粘膠板

說明 

1. 在儲存及孵育過程中避免將試劑暴露在強光中。所有試劑瓶蓋須蓋緊以防止蒸發和污染，試劑避免受到微生物的污染，因為蛋白水解酶的干擾將導致出現錯誤的結果。

2. 小心吸取試劑并嚴格遵守給定的孵育時間和溫度。請注意在吸取標本 / 標準品，酶結合物或底物時，*個孔與zui后一個孔加樣之間的時間間隔如果太大，將會導致不同的 “預孵育”時間，從而明顯地影響到測量值的準確性及重復性。而且，洗滌不充分將影響試驗結果。

3. 試劑盒保存：部分試劑保存于-20℃，部分試劑保存于2-8℃，具體以標簽上的標示為準。

4. 濃洗滌液會有鹽析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶。 

5. 剛開啟的酶聯板孔中可能會含有少許水樣物質，此為正常現象，不會對實驗結果造成任何影響。 

6. 中、英文說明書可能會有不*之處，請以英文說明書為準。

7. 所有的樣品都應管理好，按照規定的程序處理樣品和檢測裝置。

8. 有效期：6個月