本產品具有下列特點:
1.操作簡便、快捷。可直接加入到檢測平板。在96-孔板中檢測時,無需洗滌或收獲細胞,免去溶解步驟。
2. 無放射性。不需要配制液閃混合物,也不需要處理廢棄物。
3. 與MTT相比,使用更安全。不需要使用揮發性的有機溶劑來溶解甲臜產物。
4. 操作靈活,與MTT不同,平板讀數后可放回溫箱繼續孵育,使顏色進一步生成。
商品屬性：
產品英文名稱：Human 4-1BBL Protein, His tag (Animal-Free)
產品中文名稱：重組人4-1BB配體,His標簽無動物源4-1BBL
規格：5 μg/20 μg/100 μg/1 mg
貨號：EY-01X8896
用途：僅供科研研究實驗
特點&優勢:
表達宿主:大腸桿菌
種屬:人
序列:氨基酸序列來源于：人源4-1BBL Protein (Arg71-Glu254) (P41273)
活性:Measure by its ability to induce IL-8 secretion in human PBMCs. The ED?? for this effect is 1-5 ng/mL.
蛋白長度：重組人4-1BBL蛋白由184個氨基酸組成，預測分子量為20.4 KD。
純度:> 95 % ，使用SDS-PAGE檢測
通過LAL法測定，每微克蛋白里
背景
4-1BB ligand (4-1BBL) is a type II transmembrane protein that is part of the tumor necrosis factor (TNF) ligand family. As an inducible co-stimulatory molecule, it presents on several antigen presenting cell (APC) types, including B cells, macrophages and DCs. The interactions between 4-1BB and 4-1BBL trigger pleiotropic effects on the immune response including antigen presenting process, proliferation of CD4 and CD8 positive T-cells, as well as cytokine secretion from T-cells through NFκB, c-Jun, and p38 downstream signal pathways activation.Therefore, 4-1BB and 4-1BBL are recently used for the immunotherapy of cancer.
操作步驟：
(一)獲得目的基因
1、通過PCR方法:以含目的基因的克隆質粒為模板,按基因序列設計一對引物(在上游和下游引物分別引入不同的酶切位點),PCR循環獲得所需基因片段。
2、通過RT-PCR方法:用TRIzol法從細胞或組織中提取總RNA,以mRNA為模板,逆轉錄形成cDNA第一鏈,以逆轉錄產物為模板進行PCR循環獲得產物。
(二)構建重組表達載體
1、載體酶切:將表達質粒用限制性內切酶(同引物的酶切位點)進行雙酶切,酶切產物行瓊脂糖電泳后,用膠回收Kit或凍融法回收載體大片段。
2、PCR產物雙酶切后回收,在T4DNA連接酶作用下連接入載體。
(三) 獲得含重組表達質粒的表達菌種
1、 將連接產物轉化大腸桿菌DH5α,根據重組載體的標志(抗Amp或藍白斑)作篩選,挑取單斑,堿裂解法小量抽提質粒,雙酶切初步鑒定。
2、 測序驗證目的基因的插入方向及閱讀框架均正確,進入下步操作。否則應篩選更多克隆,重復亞克隆或亞克隆至不同酶切位點。
3、 以此重組質粒DNA轉化表達宿主菌的感受態細胞。
(四)誘導表達
1、挑取含重組質粒的菌體單斑至2ml LB(含Amp50μg/ml)中37℃過夜培養。
2、按1∶50比例稀釋過夜菌,一般將1ml菌加入到含50mlLB培養基的300ml培養瓶中, 37℃震蕩培養至OD600≌0.4-1.0(*0.6,大約需3hr)。
3、取部分液體作為未誘導的對照組,余下的加入IPTG誘導劑至終濃度0.4mM作為實驗組,兩組繼續37℃震蕩培養3hr。
4、分別取菌體1ml, 離心12000g×30s收獲沉淀,用100μl 1%SDS重懸,混勻, 70℃10min。
5、離心12000g×1min,取上清作為樣品,可做SDS-PAGE等分析。
公司正在出售的產品：
CTRC Protein Human 重組人 CTRC / chymotrypsin C 蛋白
TNFRSF17重組小鼠 TNFRSF17 / BCMA 蛋白 (Fc 標簽) Protein
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Mouseai-cenolandcenosomeaibody,ACAELISAKit小鼠抗中性粒/中心體抗體(ACA)檢測試劑盒規格：96T/48T
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CLIAKitforHumanInvolucrin,iNVELISAKit人套膜蛋白
微型RNA(miRNA)表達載體細胞轉染試劑盒10次
ELISAKitMIP-1β/CCL4大鼠巨噬細胞癥蛋白1β
重組人4-1BB配體,His標簽無動物源4-1BBLTNFRSF17重組小鼠 TNFRSF17 / BCMA 蛋白 (Fc 標簽) Protein
chloramphenicol/BSA 偶聯牛血清白蛋白 2mgchloramphenicol/BSA 偶聯牛血清白蛋白
PGA4重組人 PGA4 / Pepsinogen A 蛋白 Protein
CTRC Protein Human 重組人 CTRC / chymotrypsin C 蛋白
SIGIRR Protein Mouse 重組小鼠 SIGIRR / TIR8 蛋白 (His & Fc 標簽)
不適用于人類或臨床診斷
