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廣電計量檢測集團股份有限公司

Annexin V-EGFP/PI雙染細胞凋亡檢測試劑盒

參考價1-3800/件
具體成交價以合同協議為準
  • 公司名稱上海一研生物科技有限公司
  • 品       牌其他品牌
  • 型       號
  • 所  在  地上海市
  • 廠商性質代理商
  • 更新時間2024/11/19 14:12:25
  • 訪問次數375
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上海一研生物科技有限公司Shanghai yiyan bio-technology Co. Ltd.主要從事免疫學、分子生物學和常規生化試劑等為一體的科研產品銷售企業,公司自成立以來,秉承""全心全意服務于科研工作者""的企業理念,立足生物科技領域,運用生物技術和科研試劑,發展現代生物科技,為各類大中小醫院及其它醫療機構、高等院校、科研院所、企事業單位提供優質的產品,服務生物科技領域的科學研究人員。


公司具有對普通貨物、冷藏及冷凍倉庫的存儲、包裝及運輸能力。


公司將始終堅持信譽立業、以人為本、質量保證、誠信服務的宗旨,不斷拼搏,開拓進取,與各界朋友攜手共創美好未來。







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貨號 EY-01X8536 規格 20T/50T/100T
英文名稱 Annexin V-EGFP/PI Apoptosis Detection kit 用途 僅供科研研究實驗
Annexin V-EGFP/PI雙染細胞凋亡檢測試劑盒的相關產品:CRF (Corticotropin-Releasing Factor 0.5mgCRF (Corticotropin-Releasing Factor) 促腎上腺皮質激素釋放因子
IL17RC Protein Human 重組人 IL17RC 蛋白 (aa 1-454, His 標簽)
Annexin V-EGFP/PI雙染細胞凋亡檢測試劑盒 產品信息

產品僅供研究使用,不適用于人類或臨床診斷
商品屬性:

產品英文名稱:Annexin V-EGFP/PI Apoptosis Detection kit

產品中文名稱:Annexin V-EGFP/PI雙染細胞凋亡檢測試劑盒

規格:20T/50T/100T

貨號:EY-01X8541
用途:僅供科研研究實驗

特點&優勢:

  標準化,具有陽性對照。解決凋亡檢測的非標準化問題

  熒光強度和光穩定性更好;EGFPFITC的替代物,熒光強度和光穩定性更好

  適用于流式細胞術和熒光顯微鏡

保存建議:-20℃,避光保存12個月。

運輸條件:藍冰運輸

背景

細胞凋亡(apoptosis)是一種基本生物學現象,指為維持內環境穩定,由基因控制的細胞自主的有序的死亡,在多細胞生物去除不需要的或異常的細胞中起著必要的作用。在正常活細胞中,磷脂酰(PS)位于細胞膜的內側,而在細胞凋亡的早期,PS可從細胞膜的內側翻轉到細胞膜的表面,暴露在細胞外環境中。膜聯蛋白V(Annexin V) 是一種分子量為35~36KDa的鈣離子依賴型磷脂結合蛋白,能與PS高親和力特異性結合。通過熒光素或者標記Annexin V即可簡單快速地直接檢測出細胞早期凋亡情況。 碘化丙啶(propidine iodidePI)是一種核酸染料,它不能透過完整的細胞膜,而早期凋亡細胞的細胞膜是完好的,對PI有拒染性。但在凋亡中晚期的細胞和死細胞,PI能透過細胞膜而使細胞核染上。因此將Annexin V PI 匹配使用,就可以將凋亡早晚期的細胞以及死細胞區分開來。PI可以被488,532546nm激光線激發,并發出紅色熒光。

Annexin V-EGFP/PI雙染細胞凋亡檢測試劑盒

本產品具有下列特點:

 1.操作簡便、快捷??芍苯蛹尤氲綑z測平板。在96-孔板中檢測時,無需洗滌或收獲細胞,免去溶解步驟。

2. 無放射性。不需要配制液閃混合物,也不需要處理廢棄物。

3. 與MTT相比,使用更安全。不需要使用揮發性的有機溶劑來溶解甲臜產物。

4. 操作靈活,與MTT不同,平板讀數后可放回溫箱繼續孵育,使顏色進一步生成。

操作步驟:

(一)獲得目的基因

1、通過PCR方法:以含目的基因的克隆質粒為模板,按基因序列設計一對引物(在上游和下游引物分別引入不同的酶切位點),PCR循環獲得所需基因片段。

2、通過RT-PCR方法:用TRIzol法從細胞或組織中提取總RNA,以mRNA為模板,逆轉錄形成cDNA第一鏈,以逆轉錄產物為模板進行PCR循環獲得產物。

(二)構建重組表達載體

1、載體酶切:將表達質粒用限制性內切酶(同引物的酶切位點)進行雙酶切,酶切產物行瓊脂糖電泳后,用膠回收Kit或凍融法回收載體大片段。

2、PCR產物雙酶切后回收,在T4DNA連接酶作用下連接入載體。

(三)  獲得含重組表達質粒的表達菌種

1、 將連接產物轉化大腸桿菌DH5α,根據重組載體的標志(抗Amp或藍白斑)作篩選,挑取單斑,堿裂解法小量抽提質粒,雙酶切初步鑒定。

2、 測序驗證目的基因的插入方向及閱讀框架均正確,進入下步操作。否則應篩選更多克隆,重復亞克隆或亞克隆至不同酶切位點。

3、 以此重組質粒DNA轉化表達宿主菌的感受態細胞。

(四)誘導表達

1、挑取含重組質粒的菌體單斑至2ml LB(含Amp50μg/ml)中37℃過夜培養。

2、按1∶50比例稀釋過夜菌,一般將1ml菌加入到含50mlLB培養基的300ml培養瓶中, 37℃震蕩培養至OD600≌0.4-1.0(*0.6,大約需3hr)。

3、取部分液體作為未誘導的對照組,余下的加入IPTG誘導劑至終濃度0.4mM作為實驗組,兩組繼續37℃震蕩培養3hr。

4、分別取菌體1ml, 離心12000g×30s收獲沉淀,用100μl 1%SDS重懸,混勻, 70℃10min。

5、離心12000g×1min,取上清作為樣品,可做SDS-PAGE等分析。

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關鍵詞:熒光顯微鏡
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