淀粉分支酶(SBE)試劑盒
淀粉分支酶(SBE)試劑盒
本試劑盒僅供科研使用 1 淀粉分支酶（Starch branching enzyme，SBE）試劑盒說明書 （貨號：WS9350F 分光法 24 樣） 一、產(chǎn)品簡介： 淀粉分支酶（SBE，EC 2.4.1.18）是參與支鏈淀粉合成的關(guān)鍵酶之一，在淀粉生物合 成、優(yōu)質(zhì)農(nóng)作物品種選育和品質(zhì)遺傳改良研究中具有重要意義。 SBE 可使底物含量減少，從而降低底物與碘顯色劑形成的在 660nm 有吸收峰的藍(lán) 色復(fù)合物，一定時間內(nèi)吸光度下降的百分率可以反映 SBE 酶活性的大小。 二、試劑盒組分與配制： 試劑名稱 規(guī)格 保存要求 備注 提取液 液體 30mL×1 瓶 4℃保存 試劑一 液體 8mL×1 瓶 4℃保存 試劑二 粉體 mg×1 瓶 4℃保存 臨用前甩幾下，使試劑落入底部，先加 1mL 蒸餾水混合均勻，再徐徐加入煮沸 （95℃）的蒸餾水 5mL，繼續(xù)煮沸 2min， 呈透明溶解狀態(tài)，待冷卻后使用。 試劑三 液體 30mL×1 瓶 4℃保存 試劑四 液體 1.5mL×1 支 4℃保存 三、所需的儀器和用品： 可見分光光度計、1mL 玻璃比色皿（光徑 1cm）、水浴鍋、臺式離心機(jī)、可調(diào)式移液 器、研缽、冰、蒸餾水。 四、淀粉分支酶（SBE）活性測定： 建議正式實驗前選取 2 個樣本做預(yù)測定，了解本批樣品情況，熟悉實驗流程，避免實驗 樣本和試劑浪費(fèi)！ 1、樣本制備： 稱取約 0.1g 組織，加入 1mL 提取液，進(jìn)行冰浴勻漿。 4℃×12000rpm 離心 10min， 取上清，置冰上待測。 【注】：若增加樣本量，可按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例進(jìn)行提取 2、上機(jī)檢測： ① 可見分光光度計預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長至 660nm，蒸餾水調(diào)零。 ② 在 EP 管中依次加入： 試劑名稱（μL） 測定管 對照管 樣本 15 15（95℃煮沸 10min 的酶液） 試劑一 150 150 試劑二 75 75 37℃孵育 10min，沸水浴 2min，流水冷卻至室溫。 試劑三 600 600 試劑四 30 30 混勻，顯色 10min 后，全部液體轉(zhuǎn)移至 1mL 玻璃比色皿中，于 660nm 處讀取吸光值 A，ΔA＝A 對照-A 測定。 【注】若ΔA 差值較小，可加大樣本量。則改變后的加樣量 V1 需重新代入公式計算。 五、結(jié)果計算：本試劑盒僅供科研使用 1、按照蛋白濃度計算 酶活定義：以波長 660nm 的吸光度下降百分率表示，每毫克蛋白每降低 1％碘藍(lán)值為 一個酶活性單位。 SBE 活性(U/mg prot)= ΔA /A 對照管×99%÷（V1×Cpr）=66.67×ΔA /A 對照管÷Cpr 2、按照樣本鮮重計算 酶活定義：以波長 660nm 的吸光度下降百分率表示，每克組織每降低 1％碘藍(lán)值為一 個酶活性單位。 SBE 活性(U/g 鮮重)= ΔA /A 對照管×99%÷(W×V1÷V)= 66.67×ΔA /A 對照管÷W V----加入提取液體積，1 mL； V1----加入樣本體積，0.015mL； W----樣本質(zhì)量，g； Cpr----樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL，建議使用本公司的 BCA 蛋白含量檢測試劑盒。 2
