植物硝態(tài)氮/硝酸鹽含量試劑盒,微板法
植物硝態(tài)氮/硝酸鹽含量試劑盒,微板法
本試劑盒僅供科研使用 1 植物硝態(tài)氮試劑盒說明書 （貨號：WS9040W 微板法 96 樣） 一、產(chǎn)品簡介： 硝態(tài)氮是植物最主要的氮源。植物體內硝態(tài)氮含量反映了土壤中硝態(tài)氮的供應情況，可 作為土壤氮肥的指標。測定植物體內的硝態(tài)氮含量，不僅能夠反映出植物的氮素營養(yǎng)情況， 而且對鑒定蔬菜和以植物為原料的加工制品的品質也有重要的意義。 在濃酸條件下，NO3-與水楊酸反應，生成硝基水楊酸，硝基水楊酸在強堿條件下呈黃色， 該黃色物質在 410nm 處有光吸收，通過比色測定進而計算得植物硝態(tài)氮含量。 二、試劑盒的組成和配制： 【 注】：粉劑量在 mg 級別，使用前用手甩幾次或者進行離心，打開直接加入要求的試劑即可。 三、所需的儀器和用品： 酶標儀、96 孔板、天平、常溫離心機、水浴鍋、可調式移液器、濃硫酸。 四、植物硝態(tài)氮含量測定： 建議正式實驗前選取 2 個樣本做預測定，了解本批樣品情況，熟悉實驗流程，避免實驗 樣本和試劑浪費！ 1、樣本制備： ① 組織樣本： 稱取約 0.1g，加入 1mL 蒸餾水，室溫勻漿后，置于沸水浴中浸提 30min（期間不斷晃 動），待冷卻后于 25℃，12000rpm 離心 15min，取上清待測。 【注】：若增加樣本量，可按照組織質量（g）：蒸餾水體積(mL)為 1：5~10 的比例進行提取 ② 細菌/細胞樣本： 先收集細菌/細胞到離心管內，離心后棄上清；取 500 萬細菌或細胞加入 1mL 蒸餾水； 超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率 20％或 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復 30 次）， 置于沸水浴中浸提 30min（期間不斷晃動），待冷卻后于 25℃，12000rpm 離心 15min， 取上清待測。 [注]:若增加樣本量，可按照細菌/細胞數(shù)量（104個）：提取液體積（mL）為 500~1000：1 的比例提取。 ③ 液體樣本：直接檢測；若渾濁，離心后取上清檢測。 2、上機檢測： 1 酶標儀預熱 30min，調節(jié)波長至 410nm。 ② 在 EP 管中依次加入： 試劑名稱（μL） 測定管 空白管（僅做一次） 樣本 10 蒸餾水 10 試劑一 40 40 室溫(25℃)反應 10min 試劑名稱 規(guī)格 保存要求 備注 試劑一 粉劑×4 支 4℃保存 用前甩幾下或 4℃離心使試劑落入試管底部，每 支再加 1.3mL 濃硫酸充分溶解，4℃避光保存 1 周。 試劑二 液體100mL×1瓶 4℃保存 標準品 自備 若重新做標曲，則用到該試劑。本試劑盒僅供科研使用 2 試劑二 (沿著管壁務必緩慢加入) 950 950 混勻，取 200μL 于 96 孔板中，410nm 處讀取吸光值 A， △A=A 測定管-A 空白管。 【注】試劑一和試劑二含有強酸強堿物質，需做好實驗防護措施，謹慎操作！ 五、結果計算： 1、標準曲線方程：y = 0.4165x + 0.003；x 為標準品濃度（μg），y 為吸光值△A。 2、按樣本質量計算： 硝態(tài)氮(NO3 -N) 含量 (μg/g 鮮重)=[(△A-0.003)÷ 0.4165]÷(W×V1÷V) =240.1×(△A-0.003)÷W 3、按細胞數(shù)量計算： 硝態(tài)氮(NO3 -N) 含量 (μg/104 cell)=[(△A-0.003)÷ 0.4165]÷(500×V1÷V) =0.48×(△A-0.003) 4、按照液體體積計算： 硝態(tài)氮(NO3 -N) 含量 (μg/mL)=[(△A-0.003)÷ 0.4165]÷V1=240.1×(△A-0.003) V---加入提取液體積，1mL； V1---樣本的加樣體積，10μL =0.01mL； 500---細胞數(shù)量，百萬； W---樣本質量，g。 附：標準曲線制作過程： 1 制備標準品母液（500μg/mL）：稱量 3.61mg 的硝酸鉀入 EP 管中，再加 1mL 蒸餾水 充分溶解（母液需在兩天內用且-20℃保存）。 2 把母液稀釋成六個濃度梯度的標準品：0, 40, 80, 120, 160, 200. μg/mL。也可根據(jù)實 際樣本來調整標準品濃度。 3 依據(jù)測定管的加樣順序操作，根據(jù)結果即可制作標準曲線。
