植物硝態氮/硝酸鹽含量試劑盒

植物硝態氮/硝酸鹽含量試劑盒

本試劑盒僅供科研使用 1 植物硝態氮試劑盒說明書 （貨號：WS9040F 分光法 48 樣） 一、產品簡介： 硝態氮是植物最主要的氮源。植物體內硝態氮含量反映了土壤中硝態氮的供應情況， 可作為土壤氮肥的指標。測定植物體內的硝態氮含量，不僅能夠反映出植物的氮素營養 情況，而且對鑒定蔬菜和以植物為原料的加工制品的品質也有重要的意義。 在濃酸條件下，NO3-與水楊酸反應，生成硝基水楊酸，硝基水楊酸在強堿條件下呈黃 色，該黃色物質在 410nm 處有光吸收，通過比色測定進而計算得植物硝態氮含量。 二、試劑盒的組成和配制： 【注】：粉劑量在 mg 級別，使用前用手甩幾次或者進行離心，打開直接加入要求的試劑即可。 三、所需的儀器和用品： 可見分光光度計、1mL 的玻璃比色皿（光徑 1cm）、天平、常溫離心機、水浴鍋、可 調式移液器、濃硫酸。 四、植物硝態氮含量測定： 建議正式實驗前選取 2 個樣本做預測定，了解本批樣品情況，熟悉實驗流程，避免實驗 樣本和試劑浪費！ 1、樣本制備： ① 組織樣本： 稱取約 0.1g，加入 1mL 蒸餾水，室溫勻漿后，置于沸水浴中浸提 30min（期間不斷 晃動），待冷卻后于 25℃，12000rpm 離心 15min，取上清待測。 【注】：若增加樣本量，可按照組織質量（g）：蒸餾水體積(mL)為 1：5~10 的比例進行提取 ② 細菌/細胞樣本： 先收集細菌/細胞到離心管內，離心后棄上清；取 500 萬細菌或細胞加入 1mL 蒸餾水； 超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率 20％或 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復 30 次）， 置于沸水浴中浸提 30min（期間不斷晃動），待冷卻后于 25℃，12000rpm 離心 15min， 取上清待測。 [注]:若增加樣本量，可按照細菌/細胞數量（104個）：提取液體積（mL）為 500~1000：1 的比例提取。 ③ 液體樣本：直接檢測；若渾濁，離心后取上清檢測。 2、上機檢測： ① 可見分光光度計預熱 30min，調節波長至 410nm，蒸餾水調零。 ② 在 EP 管中依次加入： 試劑名稱（μL） 測定管 空白管（僅做一次） 樣本 10 蒸餾水 10 試劑一 40 40 室溫(25℃)反應 10min 試劑名稱 規格 保存要求 備注 試劑一 粉劑×2 支 4℃保存 用前甩幾下或 4℃離心使試劑落入試管底部，每 支再加 1.5mL 濃硫酸充分溶解，4℃避光保存 1 周。 試劑二 液體 50mL×1 瓶 4℃保存 標準品 自備 若重新做標曲，則用到該試劑。本試劑盒僅供科研使用 2 試劑二 (沿著管壁務必緩慢加入) 950 950 混勻，取 0.8mL 于 1mL 的玻璃比色皿中，410nm 處讀取吸光值 A，△A=A 測定管-A 空白管。 【注】試劑一和試劑二含有強酸強堿物質，需做好實驗防護措施，謹慎操作！ 五、結果計算： 1、標準曲線方程：y = 0.6716x - 0.0005；x 為標準品（μg），y 為吸光值△A。 2、按樣本質量計算： 硝態氮(NO3 -N)含量(μg/g 鮮重)=[(△A+0.0005)÷ 0.6716]÷(W×V1÷V) =148.9×(△A+0.0005)÷W 3、按細胞數量計算： 硝態氮(NO3 -N) 含量 (μg/104 cell)=[(△A+0.0005)÷ 0.6716]÷(500×V1÷V) =0.298×(△A+0.0005) 4、按照液體體積計算： 硝態氮(NO3 -N) 含量 (μg/mL) =[(△A+0.0005)÷ 0.6716]÷V1=148.9×(△A+0.0005) V---加入提取液體積，1mL； V1---樣本的加樣體積，10μL =0.01mL； 500---細胞數量，百萬； W---樣本質量，g。 附：標準曲線制作過程： 1 制備標準品母液（500μg /mL）：稱量 3.61mg 的硝酸鉀入 EP 管中，再加 1mL 蒸餾水 充分溶解（母液需在兩天內用且-20℃保存）。 2 把母液稀釋成六個濃度梯度的標準品：0, 40, 80, 120, 160, 200. μg/mL。也可根據實 際樣本來調整標準品濃度。 3 依據測定管的加樣順序操作，根據結果即可制作標準曲線。