服務(wù)背景
CTI華測檢測根據(jù)各國藥典和法規(guī)指南等要求,為新建細(xì)胞系/株、主細(xì)胞庫(MCB)、工作細(xì)胞庫(WCB)和生產(chǎn)終末細(xì)胞(EOPC)進(jìn)行鑒別試驗,以確認(rèn)細(xì)胞的來源和有無其他細(xì)胞的交叉污染。
鑒別方法
1.同工酶分析
同工酶分析可以鑒別細(xì)胞的種屬來源。對待測細(xì)胞系的乳酸脫氫酶、6-磷酸葡萄糖脫氫酶、核苷磷酸酶和蘋果酸脫氫酶的同工酶進(jìn)行PAGE膠檢測,通過與指示細(xì)胞比對,確定細(xì)胞系的種屬來源和有無交叉污染。
2.染色體檢查及核型分析
染色體核型分析可用于鑒別細(xì)胞的種屬來源。用于生物藥生產(chǎn)的新建株及其細(xì)胞庫必須進(jìn)行染色體檢查。進(jìn)行了遺傳修飾的按照新建株進(jìn)行檢查。
3.PCR法
PCR法可以鑒別細(xì)胞的種屬來源。保守基因細(xì)胞色素b(CYTB)和氧化酶1(CO1)在不同種屬間具有較大差異,被用來進(jìn)行種屬的判斷。
4.重組細(xì)胞遺傳穩(wěn)定性測試
使用限制性內(nèi)切酶圖譜進(jìn)行插入位點檢測;對mRNA/cDNA進(jìn)行測序以檢測插入片段序列;使用qPCR法檢測基因拷貝數(shù)。
5.短串聯(lián)重復(fù)序列分析STR法
STR法可用于鑒別種屬內(nèi)的細(xì)胞。不同個體來源的細(xì)胞STR位點具有多態(tài)性,據(jù)此可以區(qū)分來自于同一種屬不同個體的細(xì)胞。
6.流式檢測法
流式檢測法可用于鑒定細(xì)胞的專屬特性。重組細(xì)胞、干細(xì)胞等的鑒別可采用此法。
7.免疫熒光法
免疫熒光法可用于鑒別部分種屬細(xì)胞、鑒定細(xì)胞的專屬特性。
8.細(xì)胞形態(tài)鑒別
通過對貼壁細(xì)胞生長形態(tài)的觀測簡單判斷細(xì)胞系的來源。