轉基因植物35S基因PCR檢測試劑盒運輸:低溫
保存:-20℃避光
有效期:一年
貨期:2-3周
產品用途:公司產品僅供科研研究實驗
產品名稱 | 產品貨號 | 包裝規格 |
轉基因植物35S基因PCR檢測試劑盒 | BJ-P7937 | 50T |
試劑組成:
特點:
1. 即開即用,用戶只需要提供樣品。
2. 根據保守序列設計的專一性引物。
3. 靈敏度可以達到幾百拷貝/反應。
4. 一管式熒光定量PCR檢測,避免后續污染。
5. 本試劑盒足夠50次20μL反應體系的熒光定量PCR。
本產品只適用于科研,不能用于臨床診斷。
注意事項:
1、所有步驟均應在超凈工作臺上進行,超凈臺紫外照射至少15min。
2、所有試劑應為此實驗專用。
3、使用75%乙醇或其他去污劑擦拭工作臺,避免表面污染。
4、進入熒光定量PCR 操作實驗室后需要佩戴一次性無菌口罩、無菌乳膠手套、實驗中盡量避免與同事交談,防止PCR 模板污染。
5、實驗中使用各種規格的離心管,槍頭及配制試劑和溶解沉淀用的水,均應焦碳酸二乙酯(DEPC)處理后使用,以去除吸附的RNA酶污染。
6、使用Trizol試劑時,避免接觸皮膚或衣服。避免吸入蒸氣。
7、qPCR反應需要qPCR級水,試劑和試管。請務必使用正確類型的qPCR光學PCR管和蓋子。不可用普通的PCR管。
8、加樣前,先布局,規劃加樣順序以避免交叉污染。
9、所有實驗應均應設置無模板對照,其中包含除DNA或cDNA樣品以外的所有反應組分。
10、先配制qPCR反應混合液,減少誤差。
11、加樣后上機前,務必通過瞬離將反應液離至管底,并消除溶液中的氣泡,因為氣泡會干擾熒光檢測且降低酶活性,從而降低擴增效率。
操作流程:
RNA 提取 → 反轉錄 → 設計引物 → Q-PCR
一、 總RNA提取
A組織樣本:迅速將新鮮的組織切成合適的大小,在液氮中充分研磨后加裂解液裂解,或直接加入裂解液后用勻漿器勻漿。每30-50mg組織加1ml Trizol。
B全血樣品:加入3-5倍體積的紅細胞裂解液到血樣中,室溫孵育10min,室溫3500rpm離心6min。棄上清,原每2-3ml全血樣品加1mL Trizol。
C細胞樣品:懸浮液中生長的細胞,通過離心收集細胞后,每1×105?106細胞加入1mL Trizol,移液器吹打混勻,直接裂解或-80℃儲存一個月。貼壁生長的細胞,有兩種處理方法。一種是移除培養基后,將1mL Trizol直接加入直徑3.5cm的培養皿中裂解細胞。或是先用將貼壁細胞消化下來并收集后,再加入1mL Trizol進行裂解。(Note:加入Trizol前, PBS充分洗滌細胞去除殘余培養基。)
二、直接法
1)加入1ml Trizol試劑,混勻,冰上孵育10min。
2)4℃,12000rpm離心10min,小心轉移上清液到不含顆粒的新EP管中。
3)加入200ul氯仿,劇烈振蕩15秒,室溫孵育5min。
4)4℃,12000rpm離心15min。混合液分三層,包括最下面的氯仿有機相,中間相和上層水相。小心轉移上層水相到新的EP管(大約60%體積的Trizol),不要吸取中間相,可留下少量上層液體!(Note:質量比數量更重要!)
5)加入等體積的異丙醇,輕輕地顛倒混勻約10次,室溫放置10min。
6)4℃,12000rpm離心10min。棄上清,1ml 75%乙醇洗滌RNA沉淀兩次。
7)4℃,12000rpm離心5min,棄上清,室溫下風干5-10min(不要太干,過度干燥會導致RNA難溶解!)。將RNA溶于15μl-50μlDEPC水中。
8)立即進行反轉錄反應,或先-80℃長期保存。
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