Thermo Scientific LightShift 化學發光 RNA EMSA 試劑盒為利用電泳遷移率變動實驗 (EMSA) 研究 RNA 蛋白相互作用提供了一種無放射性解決方案。

LightShift 化學發光 RNA EMSA 試劑盒的特點：

?靈敏 — 化學發光檢測與放射性檢測相當
?節省時間 — 與放射性系統所需的 16 小時曝光相比，X 射線膠片在曝光 1 至 5 分鐘后即可顯影
?靈活 — 兼容通過不同方法化的 RNA 探針
?易于使用 — 全套試劑盒包括用于結合反應和 RNA 探針檢測的優化試劑
?無放射性 — 不存在放射性 RNA 探針所具有的廢棄物問題

RNA EMSA 試劑盒使用化 RNA 探針和化學發光底物系統，可快速且安全地檢測 RNA-蛋白復合物，靈敏度與傳統 ³²P-同位素方法相當。全套試劑盒包含構建和優化蛋白-RNA 結合條件所需的全部試劑、用于蛋白-RNA 相互作用的陽性對照及核酸相互作用化學發光檢測的全部試劑。

關于 LightShift 化學發光 RNA EMSA 試劑盒
LightShift 化學發光 RNA EMSA 試劑盒是通過與常用 DNA 凝膠遷移實驗相似的凝膠電泳遷移模式的變化檢測蛋白-RNA 相互作用的體外技術。在 RNA EMSA 中，將標記的 RNA 探針與蛋白樣品一起孵育，以開始結合。形成復合物后，通過非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳分離樣品。因為 RNA-蛋白復合物的遷移速度比游離 RNA 探針慢，所以使用 RNA 凝膠遷移實驗可以觀察到遷移距離。通過與過量未標記 RNA 結合競爭以減少特異性相互作用信號，驗證了 RNA-蛋白相互作用的特異性。一般來說，突變或不相關 RNA 探針預計不會因特異性相互作用而競爭，在 EMSA 中檢測時特定條帶遷移的強度不應降低。完整的 LightShift 化學發光 RNA EMSA 試劑盒包含設置和優化 RNA 凝膠遷移分析所需的所有試劑，包括 RNA-蛋白質復合物形成的陽性對照。

LightShift 化學發光 RNA EMSA 試劑盒使用化 RNA 探針、辣根過氧化物酶標記的親和素和化學發光檢測，以提供與使用放射性 RNA 探針時相似的靈敏度，但檢測速度更快。標記的 RNA 探針可以在市場上購買或通過使用化核苷酸進行失控體外轉錄反應生成或通過使用 Thermo Scientific Pierce RNA 3' 末端化試劑盒將標記酶促連接至 RNA 鏈的 3' 末端生成。LightShift 化學發光 RNA EMSA 試劑盒對于通過這三種方法中的任何一種進行化的 RNA 探針都有效；然而，在失控體外轉錄 RNA 探針合成期間，RNA 二級結構可能會受到化核苷酸的內部摻入的影響。因此，對于某些相互作用，可能需要定制的合成 RNA 探針或 3' 末端化探針才能實現適當的蛋白-RNA 相互作用。

關于 LightShift 化學發光 RNA EMSA 試劑盒的陽性對照品
LightShift 化學發光 RNA EMSA 試劑盒中包括的陽性對照品是鐵反應元件 (IRE) RNA 探針。IRE 結合反應與其他實驗樣品同時進行設置和檢測。在缺鐵條件下，鐵反應蛋白 (IRP) 仍與細胞中存在的 IRE RNA 結合，有效抑制鐵蛋白（鐵存儲蛋白）的翻譯，然后抑制轉鐵蛋白受體。在富鐵條件下，IRE 結合活性喪失，進行鐵蛋白和轉鐵蛋白翻譯。該系統普遍存在，并可產生穩健的條帶遷移。用 200 倍摩爾過量未標記 IRE RNA 孵育陽性對照反應將使特異性 IRE 條帶遷移信號減少約 70%，而相似倍數過量的無關 RNA 探針將不會使 IRE 條帶遷移顯著減少。這些對照品可用于各 RNA 凝膠遷移實驗，以驗證蛋白-RNA 復合物形成的正確設置、電泳、轉移和檢測。

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