蛋白免疫印跡（Western Blot）采用的是變性聚丙烯酰胺凝膠(SDS-PAGE)電泳分離蛋白質混合物，經過SDS-PAGE分離的蛋白質被到轉移到固相支撐物(NC膜，PVDF膜等)上后，固相載體以非共價鍵形式吸附蛋白質，且能保持膜上蛋白質或多肽的抗原性質不變，以固相載體上的蛋白質或多肽作為抗原，與其對應的抗體發生免疫反應，一抗再與酶標記的二抗起反應，經過底物顯色以檢測特異蛋白質表達水平。
由于Western blot技術服務具有簡便，快捷等特點，所以目前該技術也被廣泛應用于蛋白質表達水平的檢測。
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| 蛋白免疫應印跡（Western Blot）實驗服務項目 | |
| 蛋白質抽提與定量 | Western Blot |
| 圖片分析 | Western Blot實驗服務報告提交 |
Western blot實驗步驟
1、Western blot蛋白質提取：根據實驗目的的不同選擇不同的裂解液，如RIPA裂解液、NP-40裂解液、SDS裂解液，同時根據蛋白質提取組分的不同選擇不同的方法，如提取核蛋白，細胞質蛋白，膜蛋白等。
2、蛋白定量：根據蛋白質的提取條件不同，可采取不同的定量方法，如bradford法、BCA法等。
3、電泳：依據需要檢測蛋白的分子量選取分離膠的濃度，分別配置分離膠和積成膠，凝膠凝固后進行蛋白質上樣和電泳。
4、轉膜：可采取半干法和濕法轉移，當采取半干法轉膜時需防止短路：從下到上的順序：濾紙/PVDF膜/凝膠/濾紙/陰極(bio-rad轉膜儀)。
5、封閉：5%脫脂奶粉或5% BSA封閉過夜或室溫1小時,孵育時間可根據實驗需要進行改變。
6、一抗孵育：5%脫脂奶粉稀釋一抗到合適的濃度，與膜室溫孵育1小時或4度過夜，孵育時間可參考抗體說明書，并加以優化，一抗孵育后TBST洗膜3次，每次5分鐘。
7、二抗孵育：5%脫脂奶粉稀釋二抗到合適的濃度，與膜室溫孵育1小時，TBST洗膜3次，每次5分鐘。
8、顯影(ECL法)：將A、B兩種底物按比例稀釋混合均勻后滴在膜上，置于壓片盒中，迅速蓋上膠片，關閉膠盒進行曝光，曝光一定時間后取出膠片，浸入顯影液中顯影，直到出現清晰的蛋白質條帶，清水漂洗一下后放在定影液中至底片定影，清水沖凈晾干，標定Marker，掃描膠片和Western blot 圖片分析。
Western blot實驗送檢要求
新鮮或正確保存的組織、細胞或蛋白樣品。
組織樣品：每份樣品約２５０～５００ｍｇ，１０－１５ｍｇ／ｍｌ；
細胞樣品：每份樣品約１×１０６～１×１０７ 細胞數，濃度＞１μｇ／μｌ；
蛋白樣品：裂解樣品總蛋白量＞５００μｇ／樣品，濃度≥２μｇ／μｌ。
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