10xGenomics Chromium系統-單細胞測序儀
一個系統,一套工作流程,強大的測序應用? 10xGenomics公司推出了新的 Chromium™系統。利用上千萬的DNA序列標記的 GEMs ,Chromium™系統可揭示重要的基因組信息,進行單細胞測序分析使用。
1、全功能儀器10xChromiumController具有可伸縮的托盤和觸屏界面,占用空間極小,不超過 1平方英尺,卻能夠高效的將10萬到 100 萬次的移液步驟自動化,采用*的微流控系統,高通量的對樣品進行分離并帶上序列標簽,最終達到高通量檢測的目的。10xChromiumController 可以進行基因組的分析,同時可以進行單細胞水平的功能分析。
2、單細胞儀器10xChromiumSingleCellController具有可伸縮的托盤和觸屏界面,占用空間小,不超過 1平方英尺,卻能夠高效的將10萬到 100 萬次的移液步驟自動化,采用微流控系統,高通量的對樣品進行分離并帶上序列標簽,達到高通量檢測的目的。10xChromiumSingleCellController 只可以進行單細胞水平的功能分析。
產品特點:
提升組裝參數:結合該技術的組裝效果較單獨使用Illumina數據可提升十幾倍;
測序平臺通用性:應用該技術構建的文庫可與Illumina測序系統匹配;
分子片段長:分析可將短Reads組裝成長達50-100Kb 的linked-reads;
單倍體分析:可實現染色體級別Phasing,獲得精確的單體型信息。
技術原理
1. 將樣本分配到100,000s到 1000,000s微反應體系,每個微反應體系含有一種特定的DNA序列標記。
2.含有 barcode 信息的凝膠珠子首先與樣品和酶的混合物混合,然后與位于微流體 “ 雙十字” 連接中的油表面活性劑溶液結合。
3.GEMs (包含樣品、酶、凝膠珠子的混合物油滴)流到儲液器中并進行收集。凝膠珠子溶解釋放 barcode 序列,開始對樣本進行標記。將每個液滴中含有 barcode信息的產物混合。然后構建標準測序文庫。
應用方向:
1.基因組組裝:利用GemCode 平臺對長片段序列進行擴增引入barcode序列以及測序接頭引物,然后將序列打斷成適合測序大小的片段進行測序,通過 barcode 序列信息將多個Reads進行組裝,獲得跨度在30-100Kb 的 linked-reads信息,從而獲得大片段的遺傳信息。
優勢:
通過該技術構建的文庫可與Illumina測序系統相互匹配,將短Reads 組裝成長達 100Kb的片段;
結合該技術后組裝效果較單獨使用Illumina 數據可提升十幾倍;
精度高、成本低,操作難度小。
2.單細胞轉錄組測序:基于10x Genomics 新Chromium™系統利用油包水的微反應體系,通過序列標簽區別群體中的不同細胞,獲得單細胞水平的數字化基因表達譜,可實現數千甚至數萬個單細胞群體分析,解決常規 scRNA-seq方法在通量或擴展性方面存在的不足,為單細胞研究開拓新的思路。
優勢:
超高通量:單個樣本細胞檢測數可達1000-10000;
項目周期短:一天內即完成從細胞懸液到cDNA文庫構建所有的測序準備工作;
細胞捕獲效率高:單個細胞捕獲效率高達65%,可準確鑒別稀有細胞類型;
真正的單細胞測序:通過油滴-barcode-單細胞的對應關系,實現真正意義上的單細胞測序;
測序平臺兼容度廣:與Illumina各種型號的平臺高度兼容。
樣品要求:
gDNA
片段要求:主帶﹥50kb 50kb~100kb插入片段 Illumina PE150
測序深度≥100X
實例應用:
應用10x Genomics輔助基因組組裝效果評估
目前對人類基因組de novo測序和組裝的成功案例是將Illumina短片段測序、PacBio單分子實時測序技術、BioNano光學圖譜技術相結合,但這種方法中PacBio的測序成本相對較高。
本研究提供了一種基因組de novo測序和組裝的新方法。這種方法使用10x Genomics的linked-reads來獲得中長片段的數據,然后使用Illumina測序,結合BioNano構建基因組圖譜,對contigs進行anchoring和scaffolding,組裝的基因組Scaffold N50達33.5Mb。并通過對人類HapMap樣品(NA12878)進行基因組de novo組裝驗證了這種方法的可行性。
使用10x Genomics+Illumina+BioNano的方法進行基因組組裝的結果表明,scaffold N50長度和組裝的基因組長度均有提高,而scaffold的數目減少。
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