h460細胞株

細胞名稱：人大細胞肺癌細胞（STR鑒定正確）

細胞別稱：NCI-H460細胞；NCI.H460; H460; H-460; NCIH460; NCI-HUT-460; NCI-460

細胞簡稱：h460細胞株

產品貨號：TCH-C286

種屬來源：人

組織來源：肺

特征：肺癌

細胞形態：上皮細胞樣

生長特性：貼壁生長

培養體系：RPMI-1640 ＋10% FBS＋1% P/S

h460細胞株培養基貨號：TCH-G286

傳代比例：1:3-1:6，每2-3天換液一次

傳代周期：24-48 h

培養條件：氣相：95%空氣+5%CO 2，溫度：37℃

凍存條件：60%基礎培養基+30%FBS+10%DMSO，液氮儲存

質量檢測：細菌、真菌、支原體檢測均為陰性

  NCI-H460細胞是從一位大細胞肺癌者的胸水中建立的。h460細胞株表達的p53 mRNA易于檢測，其水平與正常肺細胞相當，未表現出NCI-H460細胞DNA總體結構異常。NCI-H460細胞角蛋白和波形蛋白纖維染色陽性；神經絲三聯體蛋白陰性。

細胞培養操作說明

細胞的復蘇：

 1. 從液氮中取出細胞凍存管，快速將其置入37℃水浴中解凍直至凍存管中無結晶，75%的酒精擦拭凍存管外壁；

 2. 將凍存管中的細胞移至含 6ml 培養基的15ml 離心管中，1000rpm離心 5min；

 3. 棄上清，沉淀用 6ml 培養基重懸，接種25cm2 培養瓶，于37℃，5%CO2 細胞培養箱中培養； 

傳代： 

（1）貼壁細胞：

 1. 細胞生長至覆蓋培養瓶的 80%面積時，棄25cm2 培養瓶中的培養液，用PBS 清洗細胞一次；

 2. 添加 0.25%消化液約 1ml 至培養瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后加入 5ml 培養液終止消化，再輕輕吹打細胞使之脫落，將懸液轉移至 15ml 離心管中，1000rpm 離心5min；

3. 棄上清，沉淀細胞用 1-2ml 培養基重懸，按1:2 比例進行分瓶傳代，補加培養基后放入 37℃，5%CO2 細胞培養箱中培養；

（2）懸浮細胞: 待細胞達到 1x10^6/ml 左右可按照以下方法換液培養或傳代。

方法①：收集細胞，1000rpm 離心 5min，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻，將細胞懸液按 1：2 到 1：3 的比例分到含培養基的新瓶中。

方法②：豎立放置培養瓶，細胞沉淀后棄去上半量培養基，將細胞懸液按1：2 到 1：3 的比例分到含培養基的新瓶中。凍存： 1. 離心收集細胞并進行計數(參考離心條件：1000rpm，5 min)。移去離心管中的上清液； 3. 加入適量的無血清細胞凍存液于離心管中，調整細胞濃度至 1~5×10 6 cells/mL。輕柔混勻，制成細胞凍存懸液；

4. 將離心管中的細胞凍存懸液分裝于已標示的凍存管中；

5. 直接將含細胞懸液的凍存管放入-80℃冰箱，長期冷凍保存或轉入液氮氣相中存儲。可以使用一步法凍存液。