測(cè)序用 TOPO™ TA Cloning™試劑盒可提供高效、5 分鐘的一步克隆策略（“TOPO™ 克隆”），用于將 Taq 聚合酶–擴(kuò)增 PCR 產(chǎn)物直接插入至質(zhì)粒載體以進(jìn)行測(cè)序。各試劑盒均使用具有經(jīng)過(guò)特殊設(shè)計(jì)的測(cè)序引物位點(diǎn)（可從各反應(yīng)中獲得更多的插入序列和更少的載體序列）的 pCR™4-TOPO™ TA 載體，并可根據(jù)您的需要和預(yù)算，提供多種感受態(tài)細(xì)胞或無(wú)感受態(tài)細(xì)胞。這些試劑盒具有克隆和選擇包含您 PCR 片段的重組載體所需的所有物品。測(cè)序用 TOPO™ TA 克隆™試劑盒的特點(diǎn)：
? 獲得更多序列—使用標(biāo)準(zhǔn)測(cè)序引物時(shí)，可獲得更多插入序列和更少載體序列
? 快速且簡(jiǎn)便—從 PCR 至克隆僅需 3 步，手動(dòng)操作時(shí)間減至 5 分鐘
? 高效—通過(guò)正確插入可獲得高達(dá) 95% 的克隆
? 成熟—在過(guò)去十年中性能可靠，引用次數(shù)超過(guò) 4,000 次
測(cè)序用 TOPO™ TA Cloning™試劑盒—概述
載體：pCR™4-TOPO™ TA 載體—克隆載體經(jīng)過(guò)優(yōu)化，可改善測(cè)序結(jié)果
克隆方法：TOPO™ TA Cloning ™—基于–拓?fù)洚悩?gòu)酶 I 的含 3′A 突出端（Taq 擴(kuò)增）的 PCR 產(chǎn)物與載體的 5 分鐘連接
感受態(tài)細(xì)胞：多種選擇—從包含常規(guī)、高效、噬菌體 T1-耐受性或快速生長(zhǎng)型感受態(tài)細(xì)胞的試劑盒中選擇或使用您自有的細(xì)胞
pCR™4-TOPO™ TA 載體—針對(duì)測(cè)序進(jìn)行優(yōu)化
我們從 pCR™4-TOPO™ TA 載體中刪除了大量的多克隆位點(diǎn)，以將測(cè)序引物位點(diǎn)與插入位點(diǎn)之間的距離縮短至 33 bp。這意味著測(cè)序反應(yīng)具有更少的載體序列和更多的插入序列。pCR™4-TOPO™ TA 載體具有適用于 4 種常見(jiàn)測(cè)序引物的位點(diǎn)：M13 正向、M13 反向、T7 和 T3。該試劑盒包括各等份試液。
pCR™4-TOPO™ TA 克隆選擇和操作
pCR™4-TOPO™ TA 載體包含氨芐和抗性標(biāo)志物以及用于陽(yáng)性選擇和藍(lán)/白斑篩選的 LacZα-ccdB 基因融合。載體的盡可能減少的化多克隆位點(diǎn)仍包括用于克隆 PCR 產(chǎn)物簡(jiǎn)化切除的旁側(cè) EcoRI 位點(diǎn)和用于在測(cè)序前生成嵌套缺失的 Sse8387I 位點(diǎn)。’T7 和 T3 啟動(dòng)子也用于體外轉(zhuǎn)錄。
簡(jiǎn)化的基于 TOPO™ 的克隆
使用 TOPO™ 克隆技術(shù)，無(wú)需使用含特異性序列的 PCR 引物、PCR 后程序、載體制備或其他耗時(shí)長(zhǎng)的 DNA 操作步驟。只需將 PCR 反應(yīng)物直接添加至提供的拓?fù)洚悩?gòu)酶帶電載體中，孵育 5 分鐘，并使用提供的大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)化。
高效克隆
攜帶所需插入片段的克隆高達(dá) 95%，您可以篩選更少的克隆體，節(jié)省時(shí)間和成本。該試劑盒中使用的 pCR™4-TOPO™ TA 載體含有 3′T 突出端，用于高效連接含 3′A 突出端的 Taq 擴(kuò)增 PCR 產(chǎn)物。
克隆標(biāo)準(zhǔn)
在克隆方面，TOPO™ 克隆技術(shù)已作為一種可靠技術(shù)供成千上萬(wàn)的科學(xué)家使用達(dá)十余年。快速、簡(jiǎn)單易用且高效的 TOPO™ 克隆已在多種應(yīng)用中應(yīng)用于多種不同載體。
測(cè)序用 TOPO™ TA Cloning™ 試劑盒—試劑盒選項(xiàng)
根據(jù)您的需求，測(cè)序用 TOPO™ TA Cloning™ 試劑盒可與提供不同優(yōu)勢(shì)的多種感受態(tài)細(xì)胞一起購(gòu)買(mǎi)：
? 一般克隆：0（貨號(hào) K4575-J10、K4575-01、K4575-40）
? 高效克隆：0 Electrocomp™ 細(xì)胞（貨號(hào)K4580-01、K4580-40）
? 一般克隆，噬菌體 T1 抗性：DH5α-T1R（貨號(hào) K4595-01、K4595-40）
? 快速生長(zhǎng)：Mach1™-T1R 化學(xué)感受態(tài)大腸桿菌（貨號(hào) K4530-20）
? 自行提供：靈活性高且可節(jié)省成本（貨號(hào) 450030）
我們還提供另一個(gè)版本的試劑盒，包括 PureLink™ 快速質(zhì)粒小提試劑盒（貨號(hào) K4575-02）用于分離清潔、已完成測(cè)序的重組質(zhì)粒。
相關(guān)鏈接
? 定制載體構(gòu)建和克隆服務(wù)
? 質(zhì)粒 DNA 純化試劑盒選擇指南
? PCR 試劑、儀器和耗材
? 獲得更多序列—使用標(biāo)準(zhǔn)測(cè)序引物時(shí)，可獲得更多插入序列和更少載體序列
? 快速且簡(jiǎn)便—從 PCR 至克隆僅需 3 步，手動(dòng)操作時(shí)間減至 5 分鐘
? 高效—通過(guò)正確插入可獲得高達(dá) 95% 的克隆
? 成熟—在過(guò)去十年中性能可靠，引用次數(shù)超過(guò) 4,000 次
測(cè)序用 TOPO™ TA Cloning™試劑盒—概述
載體：pCR™4-TOPO™ TA 載體—克隆載體經(jīng)過(guò)優(yōu)化，可改善測(cè)序結(jié)果
克隆方法：TOPO™ TA Cloning ™—基于–拓?fù)洚悩?gòu)酶 I 的含 3′A 突出端（Taq 擴(kuò)增）的 PCR 產(chǎn)物與載體的 5 分鐘連接
感受態(tài)細(xì)胞：多種選擇—從包含常規(guī)、高效、噬菌體 T1-耐受性或快速生長(zhǎng)型感受態(tài)細(xì)胞的試劑盒中選擇或使用您自有的細(xì)胞
pCR™4-TOPO™ TA 載體—針對(duì)測(cè)序進(jìn)行優(yōu)化
我們從 pCR™4-TOPO™ TA 載體中刪除了大量的多克隆位點(diǎn)，以將測(cè)序引物位點(diǎn)與插入位點(diǎn)之間的距離縮短至 33 bp。這意味著測(cè)序反應(yīng)具有更少的載體序列和更多的插入序列。pCR™4-TOPO™ TA 載體具有適用于 4 種常見(jiàn)測(cè)序引物的位點(diǎn)：M13 正向、M13 反向、T7 和 T3。該試劑盒包括各等份試液。
pCR™4-TOPO™ TA 克隆選擇和操作
pCR™4-TOPO™ TA 載體包含氨芐和抗性標(biāo)志物以及用于陽(yáng)性選擇和藍(lán)/白斑篩選的 LacZα-ccdB 基因融合。載體的盡可能減少的化多克隆位點(diǎn)仍包括用于克隆 PCR 產(chǎn)物簡(jiǎn)化切除的旁側(cè) EcoRI 位點(diǎn)和用于在測(cè)序前生成嵌套缺失的 Sse8387I 位點(diǎn)。’T7 和 T3 啟動(dòng)子也用于體外轉(zhuǎn)錄。
簡(jiǎn)化的基于 TOPO™ 的克隆
使用 TOPO™ 克隆技術(shù)，無(wú)需使用含特異性序列的 PCR 引物、PCR 后程序、載體制備或其他耗時(shí)長(zhǎng)的 DNA 操作步驟。只需將 PCR 反應(yīng)物直接添加至提供的拓?fù)洚悩?gòu)酶帶電載體中，孵育 5 分鐘，并使用提供的大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)化。
高效克隆
攜帶所需插入片段的克隆高達(dá) 95%，您可以篩選更少的克隆體，節(jié)省時(shí)間和成本。該試劑盒中使用的 pCR™4-TOPO™ TA 載體含有 3′T 突出端，用于高效連接含 3′A 突出端的 Taq 擴(kuò)增 PCR 產(chǎn)物。
克隆標(biāo)準(zhǔn)
在克隆方面，TOPO™ 克隆技術(shù)已作為一種可靠技術(shù)供成千上萬(wàn)的科學(xué)家使用達(dá)十余年。快速、簡(jiǎn)單易用且高效的 TOPO™ 克隆已在多種應(yīng)用中應(yīng)用于多種不同載體。
測(cè)序用 TOPO™ TA Cloning™ 試劑盒—試劑盒選項(xiàng)
根據(jù)您的需求，測(cè)序用 TOPO™ TA Cloning™ 試劑盒可與提供不同優(yōu)勢(shì)的多種感受態(tài)細(xì)胞一起購(gòu)買(mǎi)：
? 一般克隆：0（貨號(hào) K4575-J10、K4575-01、K4575-40）
? 高效克隆：0 Electrocomp™ 細(xì)胞（貨號(hào)K4580-01、K4580-40）
? 一般克隆，噬菌體 T1 抗性：DH5α-T1R（貨號(hào) K4595-01、K4595-40）
? 快速生長(zhǎng)：Mach1™-T1R 化學(xué)感受態(tài)大腸桿菌（貨號(hào) K4530-20）
? 自行提供：靈活性高且可節(jié)省成本（貨號(hào) 450030）
我們還提供另一個(gè)版本的試劑盒，包括 PureLink™ 快速質(zhì)粒小提試劑盒（貨號(hào) K4575-02）用于分離清潔、已完成測(cè)序的重組質(zhì)粒。
相關(guān)鏈接
? 定制載體構(gòu)建和克隆服務(wù)
? 質(zhì)粒 DNA 純化試劑盒選擇指南
? PCR 試劑、儀器和耗材
For Research Use Only. Not for use in diagnostic procedures.
