測序用 TOPO™ TA Cloning™試劑盒可提供高效、5 分鐘的一步克隆策略（“TOPO™ 克隆”），用于將 Taq 聚合酶–擴增 PCR 產物直接插入至質粒載體以進行測序。各試劑盒均使用具有經過特殊設計的測序引物位點（可從各反應中獲得更多的插入序列和更少的載體序列）的 pCR™4-TOPO™ TA 載體，并可根據您的需要和預算，提供多種感受態細胞或無感受態細胞。這些試劑盒具有克隆和選擇包含您 PCR 片段的重組載體所需的所有物品。測序用 TOPO™ TA 克隆™試劑盒的特點：

? 獲得更多序列—使用標準測序引物時，可獲得更多插入序列和更少載體序列
? 快速且簡便—從 PCR 至克隆僅需 3 步，手動操作時間減至 5 分鐘
? 高效—通過正確插入可獲得高達 95% 的克隆
? 成熟—在過去十年中性能可靠，引用次數超過 4,000 次

測序用 TOPO™ TA Cloning™試劑盒—概述

載體：pCR™4-TOPO™ TA 載體—克隆載體經過優化，可改善測序結果

克隆方法：TOPO™ TA Cloning ™—基于–拓撲異構酶 I 的含 3′A 突出端（Taq 擴增）的 PCR 產物與載體的 5 分鐘連接

感受態細胞：多種選擇—從包含常規、高效、噬菌體 T1-耐受性或快速生長型感受態細胞的試劑盒中選擇或使用您自有的細胞

pCR™4-TOPO™ TA 載體—針對測序進行優化
我們從 pCR™4-TOPO™ TA 載體中刪除了大量的多克隆位點，以將測序引物位點與插入位點之間的距離縮短至 33 bp。這意味著測序反應具有更少的載體序列和更多的插入序列。pCR™4-TOPO™ TA 載體具有適用于 4 種常見測序引物的位點：M13 正向、M13 反向、T7 和 T3。該試劑盒包括各等份試液。

pCR™4-TOPO™ TA 克隆選擇和操作
pCR™4-TOPO™ TA 載體包含氨芐和抗性標志物以及用于陽性選擇和藍/白斑篩選的 LacZα-ccdB 基因融合。載體的盡可能減少的化多克隆位點仍包括用于克隆 PCR 產物簡化切除的旁側 EcoRI 位點和用于在測序前生成嵌套缺失的 Sse8387I 位點。’T7 和 T3 啟動子也用于體外轉錄。

簡化的基于 TOPO™ 的克隆
使用 TOPO™ 克隆技術，無需使用含特異性序列的 PCR 引物、PCR 后程序、載體制備或其他耗時長的 DNA 操作步驟。只需將 PCR 反應物直接添加至提供的拓撲異構酶帶電載體中，孵育 5 分鐘，并使用提供的大腸桿菌感受態細胞進行轉化。

高效克隆
攜帶所需插入片段的克隆高達 95%，您可以篩選更少的克隆體，節省時間和成本。該試劑盒中使用的 pCR™4-TOPO™ TA 載體含有 3′T 突出端，用于高效連接含 3′A 突出端的 Taq 擴增 PCR 產物。

克隆標準
在克隆方面，TOPO™ 克隆技術已作為一種可靠技術供成千上萬的科學家使用達十余年。快速、簡單易用且高效的 TOPO™ 克隆已在多種應用中應用于多種不同載體。

測序用 TOPO™ TA Cloning™ 試劑盒—試劑盒選項
根據您的需求，測序用 TOPO™ TA Cloning™ 試劑盒可與提供不同優勢的多種感受態細胞一起購買：

? 一般克隆：0（貨號 K4575-J10、K4575-01、K4575-40）
? 高效克隆：0 Electrocomp™ 細胞（貨號K4580-01、K4580-40）
? 一般克隆，噬菌體 T1 抗性：DH5α-T1R（貨號 K4595-01、K4595-40）
? 快速生長：Mach1™-T1R 化學感受態大腸桿菌（貨號 K4530-20）
? 自行提供：靈活性高且可節省成本（貨號 450030）

我們還提供另一個版本的試劑盒，包括 PureLink™ 快速質粒小提試劑盒（貨號 K4575-02）用于分離清潔、已完成測序的重組質粒。

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