產品概述
7-AAD染色液為Annexin V鑒定凋亡和壞死細胞輔助試劑。
7-AAD可與雙鏈DNA特異性結合，并產生強烈的熒光，正常情況下無法透過細胞膜。由于凋亡晚期或壞死細胞膜喪失完整性，7-AAD可進入細胞內對DNA進行染色，與Annexin V搭配使用，可區分處于不同凋亡時期的細胞。
本試劑搭配Annexin V-APC檢測誘導的Jurkat細胞凋亡效果如下圖所示：
實驗操作指南步驟：
1. 細胞按照實驗方案進行凋亡誘導，300g離心5min，棄上清，收集細胞，PBS洗滌一次，輕輕重懸細胞并計數。
注：本品僅在懸浮培養的細胞中驗證，良好的細胞狀態是實驗的關鍵。貼壁生長的細胞用于凋亡檢測時，可能會因為消化、吹打等處理導致細胞的壞死或凋亡，對實驗結果可能存在不可控的影響，請謹慎處理。
2. 取1-5×10^5重懸的細胞，300g離心5min，棄上清。用PBS洗滌細胞一次，離心后棄上清，加入500μL稀釋的1×Annexin V Binding Buffer工作液重懸細胞。
3. 細胞懸液中加入5μL的Annexin V-熒光染色液和5μL的7-AAD染色液。
4. 輕柔渦旋混勻后，室溫避光孵育15-20min。
5. 反應完成后立即上機檢測。如不能及時檢測，請于冰上避光靜置并于1小時內完成檢測。
保存條件：
-20℃可保存1年；7-AAD染色液需要避光保存，建議將7-AAD染色液適當分裝后-20℃保存。
注意事項：
1. 為獲得的使用效果，請在3-6個月內使用；
2. 染色后宜盡快檢測，時間過長可能會導致凋亡或壞死細胞的數量增加；
3. 熒光物質均易發生淬滅，進行熒光觀察時，盡量縮短觀察時間，操作和存放過程中注意避光保存；
4. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
(本試劑產品僅供科學研究或進一步生產使用，不可用于臨床診斷或治療)
參考文獻
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Engineering a Second-Order DNA Logic-Gated Nanorobot to Sense and Release on Live Cell Membranes for Multiplexed Diagnosis and Synergistic Therapy(2021.06.11)
作者：Dan Wang,Shenhuan Li,Prof. Zilong Zhao
期刊：Angew. Chem. Int. Ed.
DOI：10.1002/anie.202103993
影響因子 ：15.336
引用產品：P-CA-162
