【產品名稱】
通用名稱：大腸桿菌O157:H7核酸快速檢測試劑盒
英文名稱：Rapid Detection kit for E. coli O157: H7
【包裝規格】24測試/盒
【產品編號】KJD09L
【產品簡介】
本試劑盒基于環介導的恒溫擴增技術(Loop-mediated isothermal amplification，LAMP)，用于食品中大腸桿菌O157:H7的快速檢測，可借助顯色指示劑直接判讀結果。
【檢測原理】
利用兩對特殊引物和具有鏈置換活性的Bst DNA聚合酶，使模板兩端引物結合處循環出現環狀單鏈結構，引物順利與模板結合并進行鏈置換擴增反應，實現在恒溫條件下(60-65℃)進行連續快速擴增。反應加入顯色指示劑，陰陽性結果顯色差異顯著，可直接通過顏色變化判讀結果。
【產品特點】
1. 快速簡便：將酶、引物等反應組分混勻后進行干粉化處理，增加試劑穩定性，使用時減少溶液配制步驟，更為便捷，整個檢測反應可在1 h內完成；
2. 特異性高：利用靶基因序列上的多個獨立區域設計多條引物，保證擴增反應的高度特異性;
3. 靈敏度高：檢驗限達到29 CFU/Test；
4. 判讀簡單：反應前加入顯色指示劑，反應后通過肉眼觀察反應液顏色變化或者經熒光監測儀器跟蹤熒光圖譜的變化判讀結果，直觀方便，且可有效避免反應后開蓋造成的氣溶膠污染。
【產品組分】
組分名稱 規格×數量
檢測試劑（凍干） 3排× 8管
復溶液 650 μL × 1管、
陽性對照（凍干） 1管
陰性對照（凍干） 1管
裂解液 1 mL × 1管
顯色指示劑 80 μL×1管
超純水 1 mL×1管
說明書1份
2~8℃條件下儲存，有效期為12個月、
【適用儀器】
1. PCR儀器或金屬浴恒溫器，如果檢測樣品為DNA樣品，水浴鍋即可。
2. 高速離心機，樣品的前處理需要用高速離心機做分離。
【樣品富集】
1. 樣品前處理：取25g待檢樣品置于225 mL mEC肉湯中，前增菌10-12 h，對增菌液中的菌體富集用于LAMP快速檢測。
2. 適用樣品類型：增菌液或者可疑菌落樣品。
3. 待測樣品存放：粗提的待檢DNA樣品保存于-4~0℃，不應該超過24 h;利用試劑盒提取的DNA樣品可在-20℃長期保存，但應避免反復凍融。
【使用指南】
1. 樣品前處理
A. 樣品增菌液模板DNA的制備：
a) 在檢測食品中大腸桿菌O157:H7時，吸增菌液1 mL到1.5 mL規格的無菌離心管中，6000 r/min離心5 min，棄上清;
b) 加入30 μL裂解液，充分懸浮菌體，輕彈管壁消除氣泡，99℃加熱10 min。
c) 12000 r/min離心15 min，上清即為粗提的DNA，可轉移至0.2 mL無菌離心管中，在-20℃下可長期保存。
B. 可疑菌落模板DNA的制備：
挑取可疑菌落，懸浮到含30 μL裂解液的無菌離心管中，后按照上述步驟b)、c)操作。
2. 陰、陽性對照和干粉試劑復溶
A. 陰、陽性對照復溶
使用時，加入80 μL超純水至陽性對照和陰性對照凍干粉中，待溶解后混勻，-20℃存儲待用。
B. 干粉試劑復溶
取出凍干粉試劑，按照需求剪取n個檢測試劑管(n=待檢測樣品數+1管陽性對照+1管陰性對照)，每管加入20 μL復溶液，*溶解后待用。
1. 擴增反應
A. 打開能夠提供恒溫條件的儀器，設置到64℃待用;
B. 向上述已加入復溶液的n個反應管中各加入顯色指示劑2.5 μL；
C. 向上述已加入復溶液的n個反應管中分別加入待測樣品核酸、陰性對照、陽性對照各2.5 μL，蓋緊蓋子;
D. 將所有的反應管置于恒溫儀器中，反應50 min。
2. 結果判讀
反應結束后，建議在自然光線充足的環境條件下，將樣品置于白色背景下觀察結果，陰性對照檢測試劑管呈淡橙色，陽性對照檢測試劑管呈熒光綠，待測樣品反應管以此作為對照進行判讀，若陰陽對照反應管任一結果與上述情況不符，則本次檢測結果無效，應重新檢測或與產品技術支持聯系。
【注意事項】
1. 檢測空間應嚴格分區操作，在空間條件允許情況下，試劑配置區用于配置反應所需要的所有試劑;樣品前處理區用于待測樣品的核酸提取和模板的加入;擴增觀察區用于反應進行和結果判讀。各區內空間獨立，試驗用品專用，避免交叉污染。另外，樣品處理區建議配備超凈工作臺，并且所有步驟嚴格按照說明書的要求進行。
2. 檢測過程中建議穿潔凈工作服，帶一次性手套，使用的槍頭需提前滅菌。
3. 干粉檢測試劑在使用前低速離心，確保所有的干粉沉在管底，加入復溶液后盡量避免產生氣泡，反應前檢查反應管是否蓋緊，避免泄露造成污染。
4. 陽性對照可能會作為污染源，污染其他試劑和待檢樣品，導致出現假陽性結果，在加樣過程中建議最后加入陽性對照反應管。
5. 使用顯色指示劑時，在反應結束后切忌開蓋，以防氣溶膠污染。
6. 本試劑盒僅用于食品和環境中樣品的檢測。
本試劑盒是基于核酸的分子檢測，因此并 非只能檢出大腸桿菌O157：H7活菌，判定結果有時會與傳統培養法不同，如需辨明活菌樣品存在，請用傳統微生物檢驗方法進行確證。
7. 試劑盒中反應管材質為聚丙烯，包裝盒材質是紙，使用完畢廢棄時按照醫療廢棄物相關規定處理，由使用者自行負責處理。
8. 不同批號的產品請勿混合使用，請在有效期內使用試劑盒，由于操作不當引起的誤判，以及有此誤判引發的其他事項，本公司概不負責。
